脑缺血再灌注Na―K―ATPase损伤作用实验性治疗初探.docVIP

脑缺血再灌注Na―K―ATPase损伤作用实验性治疗初探 　　【摘要】 目的：探讨尼莫地平和东莨菪碱治疗脑缺血再灌注损伤的作用机理。方法：夹闭双侧颈总动脉和椎动脉复制脑完全性缺血模型。60只家兔均分成六组，假手术组、脑缺血组、脑缺血再灌注组、脑低温治疗组、东莨菪碱治疗组、尼莫地平治疗组。采集脑和血液标本测量Na+-K+-ATPase、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）活性。结果：缺血再灌注组脑组织SOD和Na+-K+-ATPase活性降低、MDA含量升高；相反，治疗组SOD和Na+-K+-ATPase活性升高，MDA含量降低。结论：东莨菪碱和尼莫地平具有保护缺血再灌注组脑组织Na+-K+-ATPase活性的作用，其机理可能与它们抑制自由基介导的脂质过氧化，减少脂质过氧化物的生成有关。 　　【关键词】 脑缺血再灌注； Na+-K+-ATP酶； 东莨菪碱； 尼莫地平 　　脑组织Na+-K+-ATPase对缺血再灌注损伤十分敏感[1]，这在脑复苏领域中一直未引起足够的重视。目前认为再灌注大量生成的自由基介导的膜脂质过氧化是脑缺血再灌注损伤的重要机制[2-4]。本研究试图从这一角度，以头部低温为阳性对照，以东莨菪碱（莨菪碱类药），尼莫地平（Ca2+拮抗剂）为代表药，探讨它们对脑缺血再灌注Na+-K+-ATPase损伤的作用及作用机理，并进一步为莨菪碱类药和Ca2+拮抗剂防治脑缺血再灌注损伤提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验分组 大耳白兔（湖北省医学实验动物中心提供）60只，体重1.4～1.8 kg，雌雄不拘，实验前禁食12 h，饮水不限，应用25%乌拉坦静脉麻醉，机械通气；监测血气，维持PaCO2于4.32～5.47 kPa。动物均分为六组。假手术组：只做相应的操作，未夹闭血管，不造成缺血再灌注过程；脑缺血组：假手术组+脑缺血30 min；脑缺血再灌注组：脑缺血组+再灌注90 min；脑低温治疗组：脑缺血再灌注+脑低温，即再灌注开始由蠕动泵5 mL/（kg?min）输入经“体外血液降温系统”冷却的血液，再灌注期间（90 min）保持脑温在（26±0.25）℃；东莨菪碱治疗组：脑缺血再灌注组+东莨菪碱，即再灌注开始静脉注射东莨菪碱（广州侨光制药厂）0.2 mg/kg；尼莫地平治疗组：脑缺血再灌注组+尼莫地平，即再灌注开始静脉注射尼莫地平（西德 Bayer Leverkusen 公司生产）60 μg/kg。 　　各组动物实验期间保持直肠温度在37～38 ℃。再灌注期间平均动脉压维持平均在（11.24±0.25）kPa（与实验前的差异无统计学意义，P0.05）。 　　1.2 脑完全性缺血模型复制 四血管式（夹闭双侧颈总动脉和椎动脉）+低血压法[平均动脉压降至（5.45±0.21）kPa][5-6]。 　　1.3 选择性脑低温法 按照文献[7]建立自左股动脉、左颈总动脉近心端经蠕动泵、冰水槽至左颈总动脉远心端的“体外血液降温系统”。在枕叶颅骨钻一小孔，置入针样热敏探头监测脑温。 　　1.4 标本采集及测量方法 除脑缺血组外（缺血30 min末），其余组在再灌注90 min末（假手术组相应于再灌注90 min末的时间），在动物存活下取适量枕顶皮层，放入液氮中保存，在冰浴下制成脑匀浆并参照文献[8]测量Na+-K+-ATPase活性，超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），测量方法同文献[5-6]。 　　1.5 统计学处理 采用SPSS 16.0统计学软件进行统计学分析，实验数据用（x±s）表示，组间均数差异显著性检验用t检验法，P0.05为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 脑组织Na+-K+-ATPase活性 以脑缺血再灌注组最低，脑低温治疗组、东莨菪碱治疗组和尼莫地平治疗组的Na+-K+-ATPase活性显著高于脑缺血再灌注组（P分别0.05）；脑低温治疗组、东莨菪碱组和尼莫地平治疗组三组间的Na+-K+-ATPase活性差异无统计学意义（P0.05）；见表1。 　　2.2 脑组织SOD活性 3个治疗组（脑低温治疗组、东莨菪碱治疗组、尼莫地平治疗组）的SOD活性接近假手术组，差异无统计学意义（P0.05）；高于脑缺血组和脑缺血再灌注组，但与脑缺血组比较差异无统计学意义（P0.05），与脑缺血再灌注组差异有显著统计学意义（P0.01）。 　　2.3 脑组织MDA含量 以脑缺血再灌注组最高，脑缺血组次之，但脑缺血组与除脑缺血再灌注组外的其他组间差异无统计学意义（P0.05）；脑缺血再灌注组与除脑缺血组外的其他组间差异有显著统计学意义（P0.05）。 　　3 讨论 　　大量研究证实氧自由基是缺血再灌注损伤的物质基础和启动因子，其介导的膜脂质过氧化而引起生物膜结构破坏?p功