痹清饮对类风湿关节炎活动期t细胞免疫调控机理研究-中西医结合临床专业论文.docxVIP

2 结果 30 2.1 痹清饮对 T 淋巴细胞增殖的影响 30 2.2 痹清饮对 T 淋巴细胞周期的影响 31 2.3 药物对 T 淋巴细胞分化的影响 31 HYPERLINK \l _TOC_250000 实验二 RA 患者外周血中 T 淋巴细胞的活化 32 1 材料 32 1.1 检测对象 32 1.2 主要试剂 32 1.3 主要仪器设备 33 2 方法 33 2.1 外周血细胞因子的检测 33 2.2 外周血Ｔ淋巴细胞 CD3、CD4、CD8 的检测 33 2.3 外周血 CD3+CD69+、CD3+CD25+的检测 33 3 统计学处理 34 4 结果 34 4.1 外周血细胞因子的检测 34 4.2 外周血Ｔ淋巴细胞 CD3、CD4、CD8 的检测 34 4.3 外周血 CD3+CD69+、CD3+CD25+的检测 35 第三部分 研究方法与结果的讨论 36 1 对照药物的选择 36 1.1 白芍总甙(total glucosides of paeony，TGP) 36 1.2 甲氨蝶呤 37 1.3 地塞米松 37 2 JURKAT 细胞模型 38 3 治疗类风湿药物分析 38 4 实验结果探讨 40 4.1 T 淋巴细胞活化的调控作用 40 4.2 T 淋巴细胞分化的调控作用 42 4.3 T 淋巴细胞增殖及细胞周期的调控作用 43 4.4 药物对 T 淋巴细胞信号转导分子的影响 43 5 总结 45 结 语 46 参考文献 47 综 述 56 附 录 81 致 谢 86 查新报告 87 科研课题 113 PAGE PAGE 10 引 言 类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种免疫系统调节紊乱所致的炎症 反应性疾病。是一种致残率高、危害性大的常见病、多发病，正侵袭着全球所有种族 数以千万计的人口，造成个人、家庭和社会的巨大损失。据流行病学调查结果显示， 我国的患病率为 0.33%--0.36%[1]。起病 5 年内致残率高达 1/3，10 年内约达 1/2[2]。因 此有效地控制滑膜炎症，是减轻症状、延缓关节骨质破坏、保护关节功能的重要措施。 但目前在控制 RA 病情，阻止关节破坏方面仍苦无良策。甲氨蝶呤（MTX）是常用的 RA 标准治疗药物，研究证明，其能减缓 RA 骨质破坏的进程，但不能完全阻止软骨 和骨丧失，而且其毒副作用迫使一部分患者中断治疗。生物制剂的临床开发运用给 RA 的治疗带来了新的希望，如肿瘤坏死因子（TNF-a)拮抗剂 infliximab 和 Etanercept， 研究表明与 MTX 联合运用可较快的减轻炎症，抑制骨质破坏，但长期服用安全性和 疗效还有待于进一步评估，而且其高昂的价格使大多数 RA 患者难以负担。中医药治 疗 RA 等风湿类疾病历史悠久，疗效比较确切。但作用机制不明确是影响中药进一步 推广和开发的一个重要原因。因此，如何寻找更有效的治疗方法和药物，积极控制急 性发作，巩固疗效，是治疗本病的理想途径，也是世界各国医务工作者迫在眉睫的任 务。 病理研究结果表明，RA 患者的滑膜以滑膜细胞肿瘤样增生增殖、血管增生和炎 性细胞浸润为主要特点，而浸润的炎性细胞中尤以 T 细胞尤其是 CD4 细胞亚群为主， 因此 T 细胞被认为在 RA 的发病机制和治疗中起着关键性作用。异常的 T 淋巴细胞在 趋化因子等的介导下选择性地进入关节滑膜，成为浸润滑膜的主要细胞种类。这些浸 润于滑膜组织 T 淋巴细胞通过与抗原递呈细胞上的未知抗原相结合而被激活。高度活 化的 T 细胞可通过高表达 CD69、CD25、HLA-DR 等表面活化标记分子，以直接接 触的方式调控着巨噬细胞、树突状细胞、B 细胞、滑膜细胞、破骨细胞的功能，释放 各种细胞因子、抗体和酶类，由此引起滑膜炎症和增生，最终导致关节破坏。CD69 是相当敏感的 T 细胞活化的早期标志，CD25 是早中期淋巴细胞活化表达的膜表面标 记分子，HLA-DR4 是 T 淋巴细胞晚期激活抗原。文献报道 CD69、CD25、HLA-DR4 等可以反映疾病的活动程度，针对异常活化 T 细胞进行有效干预，可能有助于 RA 病 情的治疗和缓解。因此，绕过抗原特异性的抑制 T 细胞的活化成为治疗 RA 的重要战 略之一。 CD4＋T 细胞根据其分泌的细胞因子和功能不同，主要分为 Th1 和 Th2 两型细 胞。浸润滑膜的 T 细胞以 Th1 为主，产生 IFN-γ、IL-2、IL-12、INF-α等细胞因子， 代表因子为 IFN-γ，主要参与 T 细胞介导的免疫应答，加重关节的炎症和破坏；Th2 细胞产生 IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、I