苯并咪唑衍生物bm935抑制t细胞增殖的效应与机制研究-微生物与生化药学专业论文.docxVIP

摘要 I 苯并咪唑衍生物 BM935 抑制 T 细胞增殖的效应与机制研究 摘要 目的：探索苯并咪唑衍生物 BM935 抑制 T 细胞增殖的效应与机制，为寻找 BM935 的作用靶点奠定基础。 方法： 1. 使用 MACS 系统分离人和小鼠的 CD3+ T 细胞，并通过流式细胞术结合荧光标 记的 anti-CD3 检测 T 细胞纯度。 2. 流式细胞仪结合 CFSE 染色检测丝裂原或 anti-CD3/CD28 刺激的人与小鼠 T 细 胞增殖反应。 3. 流式细胞仪结合 PI 染色对活细胞进行绝对计数。 4. 使用流式细胞仪检测 T 细胞的细胞周期和 CD25 表达。 5. ELISA 检测 anti-CD3/CD28 刺激的人 T 细胞培养上清中 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、 IL-17A 和 IFN-γ 的含量。 6. 采用 IL-2 长时间培养 PBMC 的方法，获得高纯度 T 细胞。流式细胞仪检测 BM935 对 IL-2 刺激 T 细胞增殖抑制作用。 7. Annexin 和 PI 双染色检测凋亡和死亡的 T 细胞。 结果： 1. MACS 方法分离的人和小鼠的 T 细胞，纯度大于 95%。 2. BM935 能有效抑制丝裂原或 anti-CD3/CD28 刺激的人与小鼠 T 细胞增殖反应， IC50 均在 1-2μM 之间。 3. BM935 有效抑制 T 细胞增殖的浓度不影响人或鼠静息 T 细胞存活。 4. BM935 不抑制 T 细胞活化表达 CD25, 通过阻滞活化的 T 细胞周期在 G0/G1 期， 从而抑制 T 细胞增殖。 5. BM935 不抑制 T 细胞分泌 IL-2、IL-4、IL-10，但抑制 IFN-γ、IL-6、IL-17A 的 分泌。 6. IL-2 长时间培养 PBMC，可得到纯度大于 95%的 T 细胞。BM935 能有效抑制 IL-2 刺激的 T 细胞增殖。 7. 高浓度 BM935 在抑制 IL-2 刺激的 T 细胞增殖的同时，不会促进 T 细胞发生凋 亡，其凋亡和死亡细胞比例与多种对照药物作用组无明显差异。 重庆理工大学硕士学位论文 II 结论： BM935 对静息 T 细胞没有明显的细胞毒性，能选择性地抑制 T 细胞增殖。BM935 不通过抑制 T 细胞活化或者诱导 T 细胞凋亡的方式抑制 T 细胞增殖。BM935 能通 过作用于 IL-2 受体下游信号通路，阻滞 T 细胞的细胞周期抑制 T 细胞增殖。BM935 对 T 细胞分泌细胞因子的影响，不同于现有的免疫抑制剂，提示其可能作用新的靶 点。BM935 可以作为一种先导化合物用于开发新型免疫抑制剂。 关键词： 苯并咪唑衍生物；T 细胞增殖；免疫抑制剂 Abstract  PAGE 3 Effects and Mode of Action of BM935, a Benzimidazole Derivative, on Inbition of T Cell Proliferation Abstract Objective: The purpose of the study was to explore the effects and mode of action of BM935 on inhibition of T cell proliferation. Methods: CD3+ T cells were isolated by MACS system and the purity of T cells was detected by using flow cytometry combined with fluorescently labeled anti-CD3. Human and mouse T cells were stimulated by mitogen or anti-CD3/CD28, and the T cell proliferation was detected using CFSE labeling and flow cytometry. The absolute number of viable cells was counted by flow cytometry with PI staining. Cell cycle distribution and CD25 expression in T cells were measured by flow cytometry. IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A and IFN-γ levels in anti-CD3/CD28-stimulated human T