藏绵羊mtDNA Dloop区长度异质性研究.docVIP

藏绵羊mtDNA Dloop区长度异质性研究 　　摘要：用ＰＣＲ技术扩增藏绵羊线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）控制区时，发现藏绵羊群体中存在个体间和个体内的ｍｔＤＮＡ长度变异现象。ＤＮＡ测序表明，长度变异发生在ｍｔＤＮＡＤ－ｌｏｏｐ区靠近ｔＲＮＡｐｒｏ２２０~５２０ ｂｐ的位置，由该区域７５ ｂｐ的串联重复序列的重复数目的差异造成。在检测的２７个个体组成的藏绵羊群体中，四个串联重复的个体有２３个，占总群体数的８５．２％；三个串联重复的个体有３个，占１１．１％；既有三串联重复又有四串联重复的异质性个体有１个，占３．７％。线粒体ＤＮＡ异质性现象产生的原因和意义有待进一步研究。 　　关健词：藏绵羊ｍｔＤＮＡ；异质性；Ｄ－ｌｏｏｐ；串联重复 　　中图分类号：Ｓ８２６．８＋３；Q959.842 文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）17－3577-04 　　 　　Ｔｈｅ Ｌｅｎｇｔｈ Ｈｅｔｅｒｏｐｌａｓｍｙ ｏｆ Mｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏｐ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ Ｔｉｂｅｔａｎ Sｈｅｅｐ 　　 　　ＦＥＮＧ Ｚｈｅｎｇ，ＬＩＵ Ｇｕｉ－ｓｈｅｎｇ，ＷＵ Ｈｕａ－ｙｕ，ＨＵＡＮＧ Ｊｉｎg－ｓｈｕ，ＭＥＩ Ｓｈｕ－ｑｉ 　　（Ｌａｂ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｅｍｂｒｙｏ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｅｘｉｓｔｅｄ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｍｔＤＮＡ ｌｅｎｇｔｈ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｏｆ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ or in certain individuals ｗｈｅｎ ｔｈｅｉｒ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ were ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ． ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒ－ ａｎｄ ｉｎｔｒａ－ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ａｔ Ｄ－ｌｏｏｐ ｎｅａｒ ｔＲＮＡｐｒｏ 220-520bp， ａｎｄ it was ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔｓ ｗｉｔｈ ７５ｂｐ ｉｎ ｔｈａｔ ｒｅｇｉｏｎ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ２７ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ， ２３（８５．２％） ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｈａｄ ｆｏｕｒ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔｓ， ３（１１．１％） ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｈａｄ ｔｈｒｅｅ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔｓ ａｎｄ １（3.7%） ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｈａｄ ｂｏｔｈ ｔｈｒｅｅ ａｎｄ ｆｏｕｒ ｔａｎｔｅｍ ｒｅｐｅａｔｓ． Mｏｒｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ is needed ｔｏ ｃｌａｒｉｆｙ tｈｅ ｒｅａｓｏｎ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｐｌａｓｍｙ ａｂｏｕｔ ｍｔＤＮＡ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Tibetan sheep ｍｔＤＮＡ； ｈｅｔｅｒｏｐｌａｓｍｙ； Ｄ－ｌｏｏｐ； ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ 　　 　　线粒体ＤＮＡ是近年来在分子进化和系统发生关系研究方面应用最广的分子标记。脊椎动物的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）存在于所有动物细胞核外的线粒体中，是动物体内惟一存在的核外遗传物质。它是一个小的共价闭合环状分子，一般每个细胞有几千个拷贝。典型的线粒体基因组长约１６ ０００ ｂｐ，由于线粒体ＤＮＡ具有氧化磷酸化功能以及能产生ＡＴＰ，使其在细胞内有自己的生命过程，复制和转录独立进行，不受细胞周期的限制。整个线粒体ＤＮＡ由１３个编码蛋白质的基因、２个编码核糖体ＲＮＡ的基因以及２２个编码ｔＲＮＡ的基因和一个非编码区（控制区）组成。线粒体ＤＮＡ的控制区（Ｄ－ｌｏｏｐ区）在哺乳动物中位于编码脯氨酸ｔＲＮＡ和苯丙氨酸ｔＲＮＡ之间，它包含有ｍｔＤＮＡ复制和ＲＮＡ转录的起始位点。Ｄ－ｌｏｏｐ分为三个部分，分别为左功能域、中间保守域和右功能域。其中左、右功能域为Ａ碱基富集区，在遗传上为高变区。ｍｔＤＮＡ异质性分为两种：长度异质性和碱基位点异质性。近来的研究发现，兔、驴、马、绵羊、牛、猪等大多数哺乳动物在Ｄ－ｌｏｏｐ区的左、右功能域存在数目和大小各异的串联重复序列，重复序列次数的不同使得不同个体出现了ｍｔＤＮＡ分子大小不一致的现象，这种现象若存在于同一个体内就称为长度的异质性［１，２］。对人ｍｔＤＮＡ的研究表明，一些特定碱基位