蜻蜓凤梨AfERF109基因克隆及响应乙烯表达特性分析.docVIP

蜻蜓凤梨AfERF109基因克隆及响应乙烯表达特性分析 　　摘要：以热带观赏花卉蜻蜓凤梨（Aechemia fasciata）为材料，在分析蜻蜓凤梨转录组数据的基础上，结合cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends，简称RACE）技术克隆了APETALA2/乙烯反应元件结合蛋白（APETALA2/Ethylene Response Element Binding Protein，简称AP2/EREBP）家族的1个转录因子编码序列，并将其命名为AfERF109。AfERF109基因cDNA全长939 bp，开放阅读框（open reading frame，ORF）长762 bp，编码的蛋白含253个氨基酸残基。AfERF109分子量为28.275 1 ku，理论等电点为5.24；AfERF109不含信号肽和跨膜域，预测其定位于细胞核；AfERF109含有1个典型的AP2结构域，该结构域的二、三级结构构象保守；系统进化分析该蛋白分属ERF亚族的B-4类。实时荧光定量PCR分析表明，AfERF109转录本的表达量随着植株年龄的增长上调，在开花后的花柄中表达量最高。此外，AfERF109转录本的表达量受外源乙烯处理呈现正调控趋势。研究结果初步证实AfERF109参与乙烯调控路径，可能参与蜻蜓凤梨营养生长到生殖生长的时期转换及花柄的发育，为进一步研究AfERF109基因功能、通过基因工程手段调控蜻蜓凤梨开花提供了理论依据。 　　关键词：蜻蜓凤梨；AfERF109；克隆；乙烯；表达特性分析 　　中图分类号： S668.301 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）11-0051-06 　　凤梨科植物（Bromeliaceae）原产于南美洲，是一类广泛分布于热带亚热带地区、形态多样的植物之一[1-2]。人工栽培种中，按照用途可以将其分为重要的热带水果――食用凤梨（俗称菠萝，Ananas comosus）和重要的热带花卉――观赏凤梨。常用作观赏的凤梨品种有光萼荷属（Aechmea）、果子蔓属（Guzmania）、铁兰属（Tillandsia）、彩叶凤梨属（Neoregelia）、 水塔花属（Billbergia）、 姬凤梨属（Crytanthus）、 巢凤梨属（Nidularium）等[3]。观赏凤梨株型优美、花型奇特、花期持久，相应市场发展突飞猛进，已成为仅次于兰花和红掌的第三大热带花卉[4]。 　　为了满足市场需求，调节上市时间，生产上普遍使用乙烯及其衍生物促进凤梨科植物开花。利用14C标记的乙烯利处理凤梨的结果表明，其吸收外源乙烯的部位为叶片[5]。阻断内源乙烯合成后，凤梨在乙烯诱导和自然生长条件下开花时间均显著延迟[6-8]，这表明施加外源乙烯及其衍生物增加了内源乙烯含量，从而促进了凤梨开花，但一直以来内源乙烯调控凤梨等凤梨科植物开花的机制并不清楚。 　　作为一种植物生长调节物质，乙烯参与了种子萌发、幼苗生长、开花诱导、果实成熟、器官衰老和病原菌响应等植物生长发育过程[9-10]。在拟南芥中，乙烯受体蛋白结合乙烯后抑制了Raf-like Ser/Thr 蛋白酶 CONSTITUTIVE TRIPLE RESPONSE1（简称CTR1）的磷酸化能力，激活膜蛋白ETHYLENE INSENSITIVE2（简称EIN2），使得转录因子EIN3在核内稳定表达[11-14]。EIN3蛋白则通过结合到Ethylene Response Factors（ERFs）基因（如ERF1）的启动子区，调控后者的表达，最终启动植物体对各种信号的应答响应[15]。 　　ERFs基因编码的是一类家族蛋白，这类蛋白属于APETALA2/Ethylene Response Element Binding Protein（?称AP2/EREBP）家族。以前一直认为AP2/EREBP家族为植物所特有，现在发现其广泛存在于植物、原生生物、蓝藻和真菌中[16-17]。AP2/EREBP家族蛋白的共同特点是含有1或2个保守的AP2结构域。ERFs属于AP2/EREBP家族中的1个亚族，该亚族成员含有1个AP2结构域，大部分为转录激活因子，少部分为转录抑制因子[18-22]。ERFs转录因子主要通过结合到靶基因启动子区的核心AGCCGCC（简称GCC盒）顺式元件和（或）干旱响应元件（dehydration-responsive elements，简称DREs/CRT）上应答生物和非生物胁迫，功能广泛[23-27]。 　　目前关于乙烯促进观赏凤梨科植物开花分子机制的研究相对较少。Li等曾通过转录组分析在蜻蜓凤梨中筛选到一些响应乙烯的AP2/EREBP家族基因[28]，Lei等证明了AP2/ER