补黄丹对乙酸致小鼠溃疡性结肠炎治疗作用.docVIP

补黄丹对乙酸致小鼠溃疡性结肠炎治疗作用 　　溃疡性结肠炎（UC）1859年由Wilks首先描述，1920年被医学界公认，我国于1956年首次报道。过去认为该病欧美多见，亚非少见，但近几十年研究表明，UC在我国也是一种较常见的消化道疾病，并且正在逐渐成为消化病学研究的一个新热点，尽管我国目前还缺乏UC的流行病学资料，但据《世界华人消化杂志）2000年3月[1]对1978年以来几次重要的全国性消化会议的资料统计，该病发病率和患病率在我国有明显增加趋势： 　　溃疡性结肠炎（ulcerative colitis），简称UC。是一种病因不明的，以直肠和结肠的浅表性、非特异性炎症病变为主的肠道疾病，主要累及直肠和乙状结肠，也可侵及其他部分或全部结肠；病变严重者，其中少数可出现10cm以内的“反流性回肠。 　　一、材料与方法 　　（一）小鼠50只，体重20±2g，雌雄兼用均由荆州卫校提供。所有小鼠购回后用混合配方饲料喂养，自由进食饮水，每日更换饮水，饲料，保持小鼠生活环境通风及清洁卫生。应用手术器械、分光光度仪、离心机、水浴恒温震荡器、微量称重器（上海天平仪器厂）等。所用药品为补黄丹、邻甲联苯胺溶液。 　　（二）方法 　　1、分组 　　小鼠随机分成5组，即正常组、模型组、高剂量补黄丹组、中剂量补黄丹组和低剂量补黄丹组等5组，每组10只，各组体重统计学比较无显著差异（P0.05）。 　　2、模型制作 　　参照文献[ 24～26 ] 并略加改进：实验前各组小鼠分别称重，实验采用灌肠法制作小鼠溃疡性结肠炎模型。灌肠前小鼠禁食24小时，除对照组外，其余各组小鼠均经肛门插入一直径 1 mm的硅胶管，插管尖端距小鼠肛门约 2 cm，并以4%乙酸稀释液灌肠，每次 2 mL，而后保持小鼠头朝下体位，大约20秒后，注入生理盐水0.5 mL 冲洗；对照组注入等量生理盐水对照。连续灌肠4天，模型完成。 　　3、治疗 　　对造模成功的小鼠根据分组分别给以相应的药物（每100g体重），每日一次灌胃：正常组及模型组给予生理盐水 3 mL；补黄丹高、中、低剂量组分别给予等量的不同浓度的补黄丹（含生药分别为0.75 ，0.60 ，0.48 g/ mL ，使用前用无菌的蒸馏水稀释，相当于225 ，180 ，144 mg/ kg） 。连续给药7天，给药期间正常饮食。 　　（三）观测指标 　　1、大体观察 　　观察小鼠的体重、进食量、饮水量、毛发光泽度、大便性状及活动情况，并记录体重变化。 　　2、疾病活动指数（DAI） 　　建模后1―7天测定小鼠体重、观察粪便性状和隐血情况，按DAI标准进行评分（表1） ，计算DAI 分值：DAI = 体质量下降分数 + 粪便性状分数 + 便血分数。粪隐血测定：邻联甲苯胺法――将粪便涂于白色滤纸上，滴加邻联甲苯胺溶液两滴，再滴加过氧化氢一滴，观察结果。 　　表1 疾病活动指数评分标准 　　疾病活动指数参照文献[27]标准。正常粪便指成形颗粒样便；半稀便指糊状或半成形不粘肛便；稀便指水样粘肛便。 　　3、外周血白细胞总数（TWBC） 　　建模后7天 ，小鼠断尾取血， 取60微升推片瑞氏染色后，另取20微升加入280微升白细胞稀释液中混匀，在血细胞计数板上计数白细胞总数。 　　4、结肠长度、肠质量指数、结肠溃疡及炎症评分 　　建模后7天后，脱颈椎处死小鼠，取全段结肠，沿肠系膜剖开结肠，4 ℃生理盐水漂洗，将结肠上端固定于测量板上，下端负荷1g ，测量结肠负荷1g时的垂直长度。结肠经滤纸吸干后，微量称重仪测其湿质量，计算肠质量指数：肠质量指数= 结肠湿质量/ 体重×100 %[28]。将结肠展平置于冰盘上，用解剖显微镜观察结肠情况，按UC结肠溃疡及炎症评分标准计分[29]。 　　5、结肠组织病理学 　　正常组结肠黏膜上皮完整，腺体排列整齐，未见糜烂及溃疡形成，少量炎细胞浸润；模型组结肠黏膜上皮缺失，腺体结构紊乱，浅表溃疡形成，黏膜及黏膜下层水肿明显，大量炎症细胞浸润，隐窝脓肿形成，肠壁增厚；补黄丹高剂量组结肠黏膜上皮基本完整，腺体排列整齐，未见糜烂及溃疡形成，炎细胞浸润轻，肠壁轻度增厚。 　　6、统计学处理 　　实验数据采用平均数±标准差（±s）表示，组间比较采用Dun-nett-t检验，以P0.05作为有差异的界值，以P0.01作为有显著差异的界值。 　　二、结果与分析 　　（一）大体观察 　　灌肠第3天，造模小鼠开始出现腹泻、饮食减少、体毛不光泽，第 5 天开始出现不同程度的肉眼血便、蜷缩、活动减少、体重减轻。经补黄丹给药治疗一周后，治疗组小鼠症状均有不同程度改变，表现为食量增加、体重及毛色逐渐恢复，肉眼血便减少，有时仅见稀便，有时为正常大便。但UC模型组小鼠症状和体征均无明显改变。