苯并[a]芘胁迫对三疣梭子蟹的生物有效性及毒性效应研究-环境科学与工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 上海海洋大学硕士学位论文答辩委 员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 钟俊生 上海海洋大学 教授 主席 赵云龙 华东师范大学 教授 委员 王云龙 东海水产研究所 研究员 委员 蒋玫 东海水产研究所 研究员 委员 蒋玫 东海水产研究所 研究员 秘书 答辩地点 东海所 3 号楼学术报告厅 答辩日期 2015-5-31 上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 苯并[a]芘胁迫对三疣梭子蟹的生物有效性 及毒性效应研究 摘 要 多环芳烃（polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs）是由两个或两个以上苯 环以稠合方式组成的化合物，是最常见的有机污染物之一，具有强致癌性和致突 变性。其代表物之一苯并[a]芘（benzo[a]pyrene，BaP）由于在水环境中广泛分布、 化学性质稳定、致癌性强等特点而广泛被作为研究的代表。本文选择长江口常见 的三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）作为试验对象，开展 BaP 胁迫对水生生 物生物有效性及毒性效应探究，以期为海洋中 PAHs 的危害对水生生物的初期预 警提供科学有效地依据。 本文采用室内模拟构建海水 - 水生生物体系，将三疣梭子蟹（ Portunus trituberculatus）放置于 BaP 水环境中进行实验并取样。从生理、生化以及分子生 物学不同水平上分析 BaP 在三疣梭子蟹体内生物富集与释放规律的代谢，对各 种代谢酶类以及抗氧化酶系统（EROD、GST、SOD、MDA）的影响，对三疣梭 子蟹解毒基因（P4501A1、P-gp、HSP70）表达的影响，继而对试验中研究的各 类生物标志物在 BaP 水环境中的污染进行有效的评估，以探讨三疣梭子蟹的生 物有效性及 BaP 对三疣梭子蟹的毒性效应。结果如下： 1. BaP 对三疣梭子蟹的生物有效性研究 （1）富集实验 将三疣梭子蟹暴露在不同浓度的 BaP 中，经过 15 天的生物富集后结果表明： 三疣梭子蟹对 BaP 具有明显的富集能力。经过 15 天的富集，生物富集系数和吸 收速率随着 BaP 浓度的增加而减小。在 0.05 μg·L-1、0.15 μg·L-1、和 0.45 μg·L-1 实验组的富集系数分别为 186.29、171.08 和 163.00 mg·kg-1·d-1，吸收速率分别为 26.08、20.53 和 14.67 mg·kg-1·d-1。 （2）释放试验 经过 15 天的富集实验后，将三疣梭子蟹转移到清洁的海水中进行 15 天的释 放试验结果表明：三疣梭子蟹对 BaP 的排出速率较慢，且随着浓度的增加而减 小，0.05 μg·L-1、0.15 μg·L-1 和 0.45 μg·L-1 实验组的排出速率分别为 0.14、0.12 和 0.09 mg·kg-1·d-1。经过 15 天的释放试验，0.05 μg·L-1 实验组趋于恢复到对照组 I 水平， 但 0.45 μg·L-1 和 0.15 μg·L-1 试验组依然高于对照组水平（P＜0.05）。 2. BaP 胁迫对三疣梭子蟹解毒酶系统的影响机制 富集试验进行 15 天，分别于第 0 天、1 天、3 天、5 天、10 天、15 天采集 三疣梭子蟹鳃、肝脏等组织，测定其各种解毒代谢酶及抗氧化酶的活性。随后将 三疣梭子蟹移至清洁海水中，再进行 15 天释放试验，分别于第 18 天、20 天、 25 天和 30 天取样进行酶活性的测定。分析结果显示： （1）从时间-效应关系分析富集实验对各种解毒酶类活性的影响如下：各浓 度组三疣梭子蟹肝脏组织中 EROD、GST 活性随着时间呈现先升高后降低的变 化趋势；SOD、MDA 活性则随时间的增加而增加。鳃组织中 EROD、GST、SOD 活性分别在在富集的第 5 天、第 10 天和 15 天后即达到峰值，随后又趋于稳定状 态，总体上呈现先升高后降低的变化趋势；MDA 活性则随时间的增加而增加。 从剂量-效应关系分析，三疣梭子蟹体内鳃、肝脏中 EROD、GST、SOD、MDA 活性总体上随着浓度的升高，诱导作用越加明显。三疣梭子蟹鳃组织中 EROD、 GST、SOD、MDA 活性在 BaP 中富集 1 天后均受到显著诱导（P0.05）。对这 四种酶均产生诱导作用，且随着浓度的增加诱导更加显著（P0.05）。 （2）在释放阶段，不同浓度组的各种解毒酶活性均迅速降低，但不同酶活 性恢复情况存在差异。其中，0.05 μg·L-1 试验组三疣梭子蟹鳃和肝脏组织中各种 酶类经过 15 天的恢复后均已趋于对照组水平；0.15 μg·L-1 和 0.45 μg·L-1 实验组 经过 15 天的释放试验，鳃组织中 EROD、GST 和 MDA 活性均已恢