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透明质酸酶研究进展 　　【摘 要】透明质酸酶是一类能够降解透明质酸酶的酶的总称，广泛分布于自然界，存在于哺乳动物、昆虫、水蛭和细菌中。近年来，关于透明质酸酶的研究逐渐增多，其在医学、整形等领域的应用受到人们的重视。文章介绍了透明质酸酶的研究进展，对于其分类、来源、活性测定和应用进行了综述。 　　【关键词】透明质酸酶；分类；来源；活性测定；应用 　　透明质酸酶（Hyaluronidases， 简称HAase）是一种广泛分布、能够降解透明质酸（HA）产生低分子化的酶的总称[1]，大多数能够降解硫酸软骨素（Chondroitin，CS），但速度较低。最初发现透明质酸酶，是在1928年，发现睾丸及其他组织中的提取物，通过促进其他有害的毒液成分的渗透和增强它们在血液中的行动不变性组织，发挥“扩散因子”的作用。1940年，Meyer将这种“扩散因子”正式命名为Hyaluronidase。不同来源的HAase具有一定的差异性，但从其被发现以来，逐渐获得了人们的关注，已经被广泛应用于医药等领域。也基于此，HAase的性质等相关研究成为了一个值得关注的领域。 　　一、透明质酸酶酶的分类 　　根据透明质酸的作用机理，将HAase分为三种类型（Meyer， 1971）：（a） 内酰胺-β- N -乙酰- D - 氨基葡糖苷酶（EC 3.2.1.35）：该酶属于水解酶，将高分子量底物（HA）作为主要末端产物的通过内切的作用方式，作用于β-1，四糖苷键进行水解，降解后得到的终产物主要为饱和的四糖和六糖。来自于膜翅目（Hymenoptera）毒液和哺乳动物精子等动物来源的均属于此类。该的酶也催化转糖基反应，在HA的水解期间产生六糖和八糖。与后面两种透明质酸酶不同的是，这一组不仅作用于HA，还作用于硫酸软骨素。（b） β-葡糖苷酸酶（EC 3.2.1.36）：来源于水蛭和钩虫中，属于水解酶，通过内切作用方式，作用于β-1，3糖苷键，降解后得到的终产物为四糖，且该酶为特异性降解HA。（c） 透明质酸裂解酶（hyaluronate lyase，简称HL）（EC 4.2.2.1）：多数是以细菌为代表的，还包括真菌和病毒来源的一组酶，通过β-消除机制的N-乙酰己糖胺酶，通过作用于β-1，4 糖苷键，在C-4和C-5之间引入不饱和键。与前两种HAase不同，HL的最终产物是二糖而不是四糖或六糖。不同菌属来源的HL，在底物特异性上表现有所不同。 　　随着分子生物技术的发展，还可以将HAase分为两大类，依据其蛋白同源性，将其分为真核生物来源的HAase和原核生物来源的HAase。 　　二、透明质酸酶的来源 　　透明质酸酶的来源广泛，分布于各种脊椎动物（睾丸、动物毒液等）和无脊椎动物（昆虫、水蛭，十二指肠虫等）中，还存在于微生物中（链霉菌属，葡萄球菌属、梭菌属等）。 　　（一）真核生物来源的HAase 　　在人类基因组中已经发现了六种HAase-相似序列的基因编码，它们都显示出高度的同源性。它们包括人类的HYAL-1、HYAL-2、HYAL-3、HYAL-4和PH20，以及在人类中转录但未翻译的假基因HYAL-Phyal1。前三个来源于人的HAase基因（HYAL-1、-2、-3）聚集在染色体3p21.3位点，而后者的3个基因在染色体7q31.3位点上聚集。在此基础上，HAases被分为两部分。它们大多数被认为是酸性的，因为它们的活性在酸性条件下最高。相反，PH20是中性活跃的HAase，因为它在中性 pH中活性最高的，商品化的重组人透明质酸酶的氨基酸序列是PH20，其在医药领域应用广泛，是已发现的人类透明质酸酶唯一一个最适宜体内的中性生理环境同时保持高活性的酶[2，3]。2015年，美国FDA批准一种名为Halozyme的重组人类透明质酸酶注射剂，作为其他注射药物的辅助药物，用于皮下注射等促进药物扩散和吸收，但是重组人透明质酸酶价格昂贵，无法实现大规模应用，市面上目前只有国外能够购买到该种酶，且由于其的免疫原性，使之不能随意购买，因此想要使其能够在我国医药领域广泛使用，现在的情况不是很乐观。 　　目前市售的HAase中应用最为全面的是来自于牛睾丸提取的透明质酸酶（bovine testicular hyaluronidase， 简称BTH），最初是PrimaPharm公司研制的纯化牛睾丸透明质酸酶。BTH为中性HAase，主要将HA降解，终产物四糖和饱和二糖，且其还可以降解其他种类的糖胺聚糖硫酸软骨素。但提取后的该酶纯度低，掺杂了许多杂蛋白，无法保证酶的纯度，且其由于来源于动物，具有较强的免疫原性，容易引起过敏反应。 　　来自水蛭和十二指肠虫等的β-葡糖苷酸酶（EC 3.2.1.36）作用于β-1-3糖苷键之间。这种类型的酶还有待进行深入研究