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酿酒葡萄蛇龙珠茎尖复苏及生茎培养基筛选 　　摘要： 以B5改良的培养基作为基本培养基，比较了添加不同浓度6-BA与IBA组合的培养基对酿酒葡萄“蛇龙珠”茎尖复苏及生茎的影响，筛选出适合蛇 龙珠试管苗茎尖复苏的培养基为B5（改良）+1 5 mg/L 6-BA+0 05 mg/L [JP3]IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂，pH值5 8～6 0；筛选出适合蛇龙珠试管苗生茎的培养基为B5（改良）+1 5 mg/L 6-BA+ 01 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂，pH值=5 8～6 0。 　　关键词： 酿酒葡萄“蛇龙珠”；茎尖复苏培养基；生茎培养基 　　中图分类号：S663 104 文献标志码：A 　　文章编号：1002-1302（2015）08-0174-02 　　蛇龙珠，酿酒葡萄品种，别称解百纳；欧亚种，原产法国，为法国的古老品种之一，与赤霞珠、品丽珠是姊妹品种；1892年引入中国，现在山东烟台、宁夏等地区有较多栽培。葡萄茎尖因其顶端分生细胞分裂生长速度大于病毒在细胞间传递感染的速度，加之顶端分生组织代谢产生的内源激素对病毒具有钝化作用 [1]，所以茎尖顶端分生组织通常不含或含少量病毒 [1-5]。因此，通过蛇龙珠茎尖剥离脱毒技术，获取无病毒组织，再进行组织培养，可得到脱毒的蛇龙珠健康植株。本研究通过筛选脱毒过程中茎尖复苏培养基及生茎培养基，以期获得适合蛇龙珠的优良茎尖顺利复苏生长的培养基，为蛇龙珠的无毒苗快繁提供技术支持。 　　1 材料与方法 　　1 1 材料 　　复苏培养材料：4周龄蛇龙珠试管苗茎尖；生茎培养材料：在茎尖复苏培养基上培养3周的葡萄茎尖发育成的小苗。 　　1 2 方法 　　本研究以0 8～1 0 mm的蛇龙珠试管苗茎尖为脱毒处理材料，处理后的茎尖需要复苏培养才能生长为完整的植株。参考Wang等的研究 [6-8]，设计试验。茎尖复苏培养基及生茎培养基均以B5为基础培养基，对6-BA和IBA 2种植物生长调节剂进行浓度筛选。 　　1 2 1 复苏培养基筛选 　　根据文献报道以B5（改良）为基础培养基，对6-BA设计1 0、1 5、2 0 mg/L 等3个水平，对IBA设 计0 05、0 10、0 15、0 20 mg/L等4个水平，设计完全试验，配制培养基（附加30 g/L蔗糖和7 g/L琼脂，以形成固体培养基），倒茎尖复苏培养基平板；以4周龄蛇龙珠试管苗为材料，解剖镜下取 0 8～1 0 mm 茎尖于待筛选的茎尖复苏培养平板中，每板15个茎尖，每个处理设置3次重复；避光暗培养 3 d，然后光照培养。培养条件：温度（25±2）℃；光照度2 000～2 500 lx；光照时间16 h/d。1周后统计成活率，2周后统计生长状态。 　　1 2 2 生茎培养基筛选 　　根据文献资料以B5（改良）为基础培养基，设定6-BA为1 0、1 5、2 0 mg/L，设完IBA为 0 05、0 10、0 15、0 20、0 30 mg/L 5个水平，设计完全试验，配制生茎培养基（附加30 g/L蔗糖和7 g/L琼脂，以形成固体培养基），倒入300 mL玻璃瓶内，每瓶60 mL。以茎尖复苏培养基处理1、处理5所得到的3周龄茎尖为材料，每瓶生茎培养基接种3～4株葡萄小苗；光照培养，培养条件：温度 （25±2） ℃，光照度2 000～2 500 lx，光照时间 16 h/d。4周后统计成活率及生长状况。 　　2 结果与分析 　　2 1 不同处理对蛇龙珠茎尖复苏的影响 　　从表1可以看出，处理1、处理2的茎尖复苏培养基茎尖成活率最高，都能达到100%；处理5、处理6、处理7成活率较高，都在90%以上。 　　由表2可知，处理1、处理5、处理8茎尖复苏培养基茎尖生长情况好，叶片面积大（图1），最终得分都在90分以上。 　　综合考虑，处理1、处理5茎尖复苏培养基是效果好的葡萄茎尖复苏培养基。 　　2 2 不同处理对蛇龙珠组培苗生茎的影响 　　从表3可见，茎尖在处理5复苏培养基上复苏3周后，转入B5（改良）+1 5 mg/L 6-BA+0 1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂的生茎培养基效果最好：轻度褐化、无明显愈伤、有单株分化、长势好（图2）；其余培养基则表现为愈伤丛芽、严重褐化、长势过弱或死亡。 　　3 讨论 　　3 1 茎尖复苏培养基筛选 　　好的茎尖复苏培养基不仅茎尖成活率要高，而且茎尖应该生长良好、长势旺盛。本研究从茎尖成活率和茎尖生长情况两方面对茎尖复苏培养基进行综合考量，最终选出成活率高、长势旺盛的2种茎尖复苏培养基供后续研究使用。 　　6-BA是人工合成的植物生长调节剂，具有促进细胞延长、细胞分裂、芽形成等作用。IBA也是人工合成的植物生