钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ和胞外信号调节激酶对高脂血症大鼠勃起功能障碍影响实验研究.docVIP

钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ和胞外信号调节激酶对高脂血症大鼠勃起功能障碍影响实验研究 　　【摘要】 目的 探讨钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaM-pKⅡ）和胞外信号调节激酶（ERK1/2）对高脂血症大鼠勃起功能障碍（ED）影响的作用机制。方法 选取30只SPF级雄性SD大鼠，体重200±20g，采用随机数字表法分成高脂血症组（15只）和对照组（15只）。高质血症脂组给予自制高脂饲料喂养，对照组给予普通饲料。饲养30天时检测各组大鼠血清血脂情况，高脂血症组明显高于对照组（2倍），造模成功；45天时对各组大鼠行阿朴吗啡诱导阴茎勃起情况。60天时，应用电生理测压仪（BIOPAC-MP150）测各组大鼠阴茎海绵体内压及勃起情况，然后处死大鼠取标本分别采用ELISA方法和激光共聚焦显微镜检测大鼠阴茎海绵内CaMKⅡ及ERK的含量。结果 45天诱导阴茎勃起次数高脂血症组与对照组相比，差异无统计学意义（p0.05）；60天时，应用电生理测压仪（BIOPAC-MP150）测各组大鼠阴茎海绵体内压及勃起情况，高脂血症组与对照组差异有明显统计学意义（p0.05）；ELISA方法检查结果：高脂组CaMKⅡ、ERK1/2含量与对照组比较有统计学意义（p0.05）；激光共聚焦检查结果：高脂血症组海绵体组织内的CaMKⅡ、ERK1/2明显比对照组的表达增多。结论 高脂血症状态下阴茎海绵体中CaMKⅡ与ERK1/2的表达呈正相关；且CaMKⅡ和ERK1/2的表达增加是导致ED的重要机制之一，将为临床治疗勃起功能障碍提供一种新思路和新方法。 　　【关键词】 高脂血症大鼠；勃起功能障碍；CaMKⅡ；ERK1/2 　　目前，全球约有1亿多ED患者，45-75岁的男性中，约有58%的男性存在不同程度的勃起功能障碍。ED是影响男性健康的常见疾病。随着国内、外对勃起功能障碍（ED）的研究的进一步深入，发现众多代谢性疾病直接影响阴茎勃起功能，糖尿病、高脂血症、代谢紊乱、周围神经病变等等，其中以高脂血症最为著。目前已证明高脂血症与勃起功能障碍的发生密切相关。因此本课题对高脂血症时CaMKⅡ和ERK1/2含量变化进行研究，从而揭示高脂血症性勃起功能障碍的发病机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 购自大连医科大学动物实验中心SPF级雄性SD大鼠60只，3月龄，体重280±30g，按随机数字法分成2组：高脂血症组和对照组各15只。 　　1.2 主要试剂及仪器 大鼠CaMKⅡ及ERK1/2 ELISA试剂盒（上海蓝基生物科技公司）。自制高脂饲料，基础饲料。酶标仪：美国宝特800，数显恒温水浴锅：（产地：金坛市医疗仪器厂），离心机：上海安亭科学仪器厂（Anke TGL-16G），加样枪：EPP。阿扑吗啡。激光共聚焦显微镜（OLYMPUS，日本），电生理测压仪（BIOPAC-MP150）等等。 　　1.3 动物模型制备 高脂血症组大鼠每天给予高脂饲料（配方：3%胆固醇、18%猪油、0.6%胆酸钠、14%蛋黄粉、54.4%基础饲料）喂养；对照组每天给予标准复合饲料喂养。饲养30天时，大鼠行内眦采血法进行血清血脂检查，检测均用大型全自动生化分析仪测定。高脂血症组血清血脂水平均是对照组大鼠的2倍以上，确认模型成立。 　　1.4 勃起功能检测 饲养45天时，各组大鼠行阴茎勃起情况检查，于大鼠颈部皮下注射阿扑吗啡（APO）100ug/Kg进行实验，每只大鼠注射后观察30分钟，记录阴茎勃起次数，勃起标准为阴茎充血及末段阴茎体露出为勃起一次。 　　饲养60天时，采用电生理测压仪（BIOPAC-MP150）检测阴茎海绵体内压及勃起情况，每只大鼠观察约10-15分钟使其反应基线稳定，记录每次阴茎海绵体内压，进行统计学分析。 　　1.5 实验取材 待60天完成电生理后过量麻药处死大鼠，取阴茎海绵体组织，然后将各组标本标记：一部分行4.0%甲醛固定，另一部分置于-80℃冰箱冷冻，以供后续试验备用。 　　1.6 用ELISA方法大鼠阴茎海绵内CaMKⅡ及ERK1/2的含量 大鼠阴茎海绵内CaMKⅡ及ERK的含量：包被、加样、加酶标抗体、加底物液显色、终止反应、结果判定：测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 　　1.7 激光共聚焦显微镜检测大鼠阴茎海绵内CaMKⅡ及ERK1/2的含量 取材组织标本，用丙酮固定，切片机切片，脱蜡染色后甘油与混合液封片，阴凉处晾干，上机检测。 　　1.8 统计学分析 所得资料数据使用SPSS for Windows 11.5统计软件包进行统计，以平均数±标准差 表示，两两比较用t检验，显著性水准为0.05。 　　2 结 果 　　2.