阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织TIM3TIM1表达影响.docVIP

阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织TIM3TIM1表达影响 　　【摘要】　目的：观察阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental　autoimmune　encephalomyelitis，　EAE）Wistar大鼠的发病情况、组织病理变化及脑组织内T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白-3（TIM-3）、T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白-1（TIM-1）表达水平的影响。方法：将30只雌性Wistar大鼠随机分为佐剂组、EAE组、阿托伐他汀组，以豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）诱发制备大鼠EAE模型，并于给予GPSCH当日开始1次/d灌服0.1%　PBS溶液1.5　ml/只（佐剂组和EAE组）和含阿托伐他汀的0.1%　PBS溶液，1次/d，剂量为8　mg/（kg·d），连续13　d，观察EAE症状并评分，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Tim-1　mRNA、Tim-3　mRNA在脑组织中的表达。结果：阿托伐他汀组发病率降低、临床症状减轻，体重下降减少（P0.05）；与佐剂组比较，EAE组TIM-3　mRNA明显上升（P0.05），阿托伐他汀组TIM-3　mRNA较EAE组明显下降（P0.05）；与佐剂组比较，EAE组TIM-1　mRNA下降（P0.05），阿托伐他汀组TIM-1　mRNA较EAE组上升（P0.05）。结论：EAE大鼠TIM-3上升，TIM-1下降，提示其在EAE发病机制中发挥作用，通过下调TIM-3、上调TIM-1的表达，可能是阿托伐他汀对EAE保护作用机制之一。 　　【关键词】　实验性自身免疫性脑脊髓炎；　多发性硬化；　TIM-3；　TIM-1；　阿托伐他汀 　　实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental　autoimmune　encephalomyelitis，　EAE）是以中枢神经系统炎性脱髓鞘为特征的疾病，是研究MS的理想动物模型[1]。T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白（TIM）家族是一类具有免疫调节作用的蛋白，可以作为Th细胞的分化标志[2]。TIM-3是TIM家族中的一员，Monney等[3]研究发现，在体内运用TIM-3特异性抗体使EAE小鼠疾病死亡率增加，中枢神经系统炎症病灶增多，增加和激活CD11b+细胞。TIM-1最先被发现与变应性哮喘的发生有关[4]。TIM-1选择性表达于Th2细胞上，在Th1细胞及Th17细胞上没有表达[5]。目前研究提示，在人体中，TIM-1不仅与过敏性疾病和哮喘有关，在自身免疫性疾病中也起着调节作用，如在类风湿关节炎的产生与TIM-1的外显子4相关，C反应蛋白与类风湿因子的水平与TIM-1基因的启动子多态性相关[6]。在MS缓解期患者脑脊液单核细胞上可检测到TIM-1　mRNA的表达，提示TIM-1对MS的恢复具有有益作用，其机制可能与免疫耐受有关[7]。 　　目前各种能够缓解EAE病情的免疫调节药物在MS的治疗作用仍在试验阶段，且存在相关的副作用及潜在的毒性作用[8]。最近发现，他汀类药物除了其调脂作用外，亦存在免疫调节作用使之用于治疗中枢神经系统脱髓鞘疾病，如MS的研究越来越多[9]。他汀类药物运用于MS以及类风湿关节炎等得临床试验也已经得到有前景的结果[10]。他汀类药物的免疫调节作用包括有保护血脑屏障的完整性[11]，抑制中枢神经系统炎症细胞浸润[11]，促进Th1细胞反应向Th2细胞反应偏移等[9]。最近发现除外其免疫调节作用外，他汀类药物对EAE还具有神经保护和促进神经再生的作用[12]。 　　本实验从免疫诱导第1天开始予以阿托伐他汀药物治疗，根据国外文献报道，选择8　mg/（kg·d）作用治疗剂量，观察阿托伐他汀对EAE的治疗作用。并通过检测TIM-3及TIM-1　mRNA的表达情况检测阿托伐他汀是否通过影响其表达对EAE起治疗作用。 　　1　材料与方法 　　1.1　实验动物　Wistar大鼠30只，6～8周龄，体重（200±20）g，雌性；豚鼠10只，300～400　g，雌雄不限。购于湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场。在中南大学湘雅二医院动物实验中心分笼饲养，每笼5只。喂食本医院动物实验中心配置的大鼠饲料，饮自来水，保持室温（18±2）℃，相对湿度（50±10）％，人工光照时间12　h/d，自动抽风，每日上午更换食、水和垫料1次，饲养观察3　d，能正常进食和饮水者纳入实验用鼠。 　　1.2　主要试剂　阿托伐他汀购自大连辉瑞制药有限公司，卡介苗（BCG）冻干粉购自北京生物制品研究所，医用羊毛脂购自重庆化学试剂厂，罗可沙尔坚牢蓝购自Sigma公司，RT-PCR试剂盒由Fermentas公司生产，EDTA、Tris购自Sigma公司，引物由上海生物工程技术有限公司生产。 　　1.3　抗原制备　完全福氏佐剂（