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雄黄遗传毒性研究 　　【摘要】 目的 评价雄黄的急性毒性和遗传毒性，为临床提供毒理学依据。方法 急性毒性：设3.50、2.98、2.53、2.15、1.83、1.55g/kg剂量组灌胃，对照组给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液(Sodium Carboxymethyl Cellulose，CMC)。Ames试验：设雄黄浸出液原液、1：1、3：1、7：1和15：1稀释作为中、低、次低和最低剂量组，各剂量组均加不同浓度的雄黄浸出液0.5ml，观察加或不加S9混合物对TA 97、TA 98、TA 100、TA 102、TA1535菌株的影响。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：设1、0.5、0.25g/kg三个剂量组，2次灌胃后，24h制片，镜检。CHL细胞染色体畸形试验：设雄黄浸出液1：15、1：31、1：63稀释液三个剂量，加药后将细胞放入CO2培养箱中37℃培养24-48小时。终止培养前4小时，每只细胞培养皿中加入秋水仙素溶液0.1ml，收获细胞，制染色体标本、镜检。结果 急性毒性试验表明：本次实验雄黄的LD50为2.069g/kg。Ames试验：为阴性结果，雄黄有抑制细菌生长的作用。雄黄对小鼠骨髓嗜多染红细胞有致突变作用和对CHL细胞染色体有致畸变作用。结论 本次试验中该批次的雄黄有一定的遗传毒性。 　　【关键词】 雄黄；遗传毒性；急性毒性 　　雄黄（realgar）是矿物类中药，主要成分为三硫化二砷（As2S3）。现代药理学证明雄黄具有抗肿瘤、镇痉、止痛、杀虫和抗菌等功效［1］。长期以来中医认为雄黄有毒，内服宜慎，不可久用，孕妇禁用，因此雄黄一直作为有毒中药受到药监部门的严格控制。雄黄含有对人体有害元素砷，临床上亦有过量服用而中毒的报道［2］。对雄黄的毒理学研究发现，雄黄具有肝肾毒性［3-4］，但是否具有遗传毒性报道不多，为此我们用小鼠骨髓细胞微核试验(micronucleus tes，MT)、CHL细胞染色体畸变试验(in vitro mammalian cells chromosome aberration test)和鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（the rat typhoid salmonella mutate back test，AMES）对雄黄进行遗传毒性研究。1 材 料 　　1.1 实验动物 ICR小鼠35-38g；由上海斯莱科动物有限公司提供［实验动物生产许可证号：SCXK（沪）2007-0005。动物购入后，均饲养在清洁级动物实验室内，温度控制在20-25℃，湿度控制在40-70%。动物自由摄食、饮水，1周换1-2次垫料。Ames标准实验菌株，实验前对各个菌株性状进行鉴定。由上海市疾控中心赠与。CHL细胞株，由上海中科院药物所赠与。 　　1.2 主要仪器及试剂 　　1.2.1 Motic BA400生物显微镜。 　　1.2.2 主要试剂 雄黄，产地湖南，由上海封浜中药饮片厂加工炮制成饮片为橙黄色细粉末，批号为H2007052401。羧甲基纤维素钠（CMC-Na）批号环磷酰胺，批号9J596A；Giemsa染液及其他试剂均为国产分析纯。2 方 法 　　2.1 实验方法 　　2.1.1 小鼠急性毒性试验 ICR小鼠70只，体重20-24g，雌雄各半，采用随机分组法将小鼠分为7个组，雄黄各剂量组间距比设为1：0.85依次递减。空腹灌胃1次，观察2周。 　　2.1.2 小鼠骨髓微核试验［5］ ICR小鼠30只，体重35-38g，将小鼠分为5组，雄黄给药组剂量分别为0.25、0.5、1g/kg，阳性对照组为环磷酰胺80mg/kg，（给药一次）阴性对照组为等量羧甲基纤维素钠溶液（0.5%CMC），分2次灌胃，给药后24h处死小鼠，取一侧股骨骨髓材料制片、染色、镜检阅片，每片检测2000个嗜多染红细胞，计数微核数，求出各组微核率(MNF)，并进行显著性检验。 　　2.1.3 CHL染色体畸变试验［6］ 将1g生药溶解于10ml的HBSS中形成混悬液，37℃水浴摇床以100转/分水浴震荡4小时后静止20小时，取上清液过滤后制成雄黄浸出液备用。将不同稀释度的雄黄浸出液（1：15、1：31、1：63稀释）加入到单层CHL细胞上，将细胞放入CO2培养箱中37℃培养24-48小时。终止培养前4小时，每只细胞培养皿中加入秋水仙素溶液0.1ml，使其终浓度达到0.2μg∕ml。然后收获细胞，制染色体标本。在光学显微镜下观察染色体中期分裂相，分别记录染色体的结构畸变，数目畸变（多倍体）以及畸变细胞数和畸变类型，分析判断在体外雄黄对CHL细胞的染色体畸变作用。本试验同时设立阴性对照（DMSO）和阳性对照（非活化阳性对照丝裂霉素C）。 　　2.1.4 Ames［7］ 试验鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型突变菌株TA 97、T