食管鳞状细胞癌组织中ADAMTS18基因表达及临床意义.docVIP

食管鳞状细胞癌组织中ADAMTS18基因表达及临床意义 　　[摘要] 目的 通过对食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中含凝血酶敏感素基序的去整合素金属蛋白酶18（ADAMTS18）mRNA及蛋白表达情况的检测，探讨ADAMTS18在ESCC发生、发展中所起的作用及临床意义，为ESCC的临床早期诊断及预后评估提供新的客观参考指标。 方法 采用半定量-逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）的方法及免疫组化S-P的方法（生物素-链霉卵白素过氧化酶系统）对72例ESCC组织及癌旁正常组织中ADAMTS18 mRNA及蛋白的表达进行检测。 结果 ①ADAMTS18 mRNA在ESCC组织中的相对表达量为（0.361±0.115），在癌旁正常组织中表达量为（0.879±0.265），ESCC组织中ADAMTS18 mRNA表达量显著低于癌旁正常组织（P 0.01）；ADAMTS18 mRNA在高/中分化鳞癌组中的相对表达量为（0.496±0.153），在低分化鳞癌组中为（0.232±0.088），低分化鳞癌组ADAMTS18 mRNA表达量显著低于高/中分化鳞癌组（P 0.05）。②ADAMTS18蛋白在ESCC组织中的阳性表达率为34.7%（25/72），在癌旁组织中的阳性表达率为93.1%（67/72），ADAMTS18蛋白在ESCC组织中阳性表达率显著低于癌旁组织（P 0.01）；ADAMTS18蛋白在高/中分化鳞癌组中的阳性表达率为45.4%（20/44），在低分化鳞癌组中为17.8% （5/28），低分化鳞癌组ADAMTS18蛋白阳性表达率显著低于高/中分化鳞癌组（P 0.05）。 结论 ADAMTS18基因在ESCC中的异常表达与ESCC的发生、发展及组织分化程度关系密切，检测ESCC组织中ADAMTS18基因的表达情况，有助于ESCC早期诊断及预后评估。 　　[关键词] 食管鳞状细胞癌；ADAMTS18；表达 　　[中图分类号] R735.102 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）02（a）-0076-04 　　食管癌（esophageal carcinoma，EC）属于上消化道常见的恶性肿瘤，全球每年新发食管癌人数约40万例，死亡约30万例，其中我国食管癌发病率和病死率在全球位居首位[1]。目前迫切需要对食管癌发病原因及机制进行深入研究，从而寻求敏感、特异的早期诊断指标和治疗方法。含凝血酶敏感素基序的去整合素金属蛋白酶（a disintegrin and metalloprotease with thrombospondin motifs，ADAMTS）家族的蛋白水解功能可能与肿瘤发生、发展、侵袭有关。该家族不同成员在不同来源肿瘤的发生中所起的作用也不尽相同。国内外对ADAMTS18基因的表达与食管癌的关系罕见报道。本实验通过对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）组织及癌旁正常组织中ADAMTS18 mRNA及蛋白的表达进行检测，探讨ADAMTS18与ESCC发生、发展的相关性及其生物学意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 标本来源 组织标本均来自河北医科大学第四医院2008～2011年的ESCC手术患者，共72例，其中，男53例，女19例，年龄43～76岁，平均（61.2±2.5）岁。本研究经医院伦理委员会通过，入选患者均签署了知情同意书。按照1997年国际抗癌联盟（UICC）标准进行TNM分期（Ⅰ期2例，Ⅱ期38例，Ⅲ期29例，Ⅳ期3例）；根据有无淋巴结转移分为有淋巴结转移组（45例）和无淋巴结转移组（27例）；按肿瘤组织分化程度分为高分化组（17例）、中分化组（27例）、低分化组（28例）。所有患者术前均未经化疗和放疗，术中取癌旁正常黏膜组织以及ESCC原发灶组织。所有入选患者均通过胃镜检查诊断为食管癌，且术后病理检查确诊为ESCC，保存完整临床病理资料及手术记录。术中切取标本时，遵循先取癌旁组织、后取肿瘤组织的原则，切除标本一部分用于提取RNA，一部分用于制作蜡块（HE染色及免疫组化染色）。 　　1.1.2 主要试剂 TRIzol（美国SBS公司）、总RNA提取试剂（美国Promega公司）、逆转录PCR试剂盒（美国Foments 公司）、绿色体系（美国Promega 公司）、DNA Marker（北京Solarbio科学技术有限公司）、氯仿、异丙醇（上海化学试剂总厂）、琼脂糖（西班牙进口分装）、DEPC（美国Invitrogen公司）、EB（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）、兔抗人ADAMTS18多克隆抗体（生工生物工程有限公司）、免疫组化试剂盒（北京中杉金桥生物技术开发公司）、E