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乙肝表面抗体衰减人群细胞免疫状态与影响因素分析 　　摘要：[目的]探索乙肝疫苗接种人群免疫状态和乙肝表面抗体衰减的影响因素。[方法]采用多阶段随机抽样的方法，在上海市卢湾区和松江区随机抽取600名既往全程接种乙肝疫苗的对象，将其中HBsAg、抗－HBc阴性且抗－HBs100 mIU／mL、性别相同、年龄±1岁的对象作为阳性对照组，检测IFN－γ和IL－4。[结果]多因素非条件Logistic回归模型提示，免疫年限(OR=2.01)、牙科治疗史(OR=1.55)和婚姻状况(OR=13.17)与人群乙肝表面抗体衰减存在密切联系。细胞免疫检测提示，乙肝表面抗体衰减实验研究组对象的IFN－γ阳性细胞百分比和IL－4阳性细胞百分比均显著低于实验对照组。[结论]乙肝表面抗体衰减者清除HBV的特异性细胞免疫可能和体液免疫一样均处于弱化状态，推行乙肝疫苗加强免疫策略应该是今后乙肝防治工作的重点。 　　关键词：乙肝表面抗体；衰减；乙肝疫苗；加强免疫 　　中图分类号：R512.6+2　文献标志码：A 　　 　　乙型病毒性肝炎(乙肝)是全球性的公共卫生问题之一。自1981年乙肝疫苗问世以来，疫苗的保护效果、免疫原性和安全性已得到广泛认可，但随着接种时间的延长，免疫人群的保护性抗体水平逐年下降。上海市自1986年试点推行新生儿乙肝疫苗接种工作至今已近23年，本次研究通过对上海市600名乙肝表面抗体衰减对象进行流行病学调查和细胞免疫检测，旨在探索不同免疫年限乙肝疫苗接种人群的免疫状态和乙肝表面抗体衰减的影响因素，为乙肝防治工作和免疫策略的制定提供依据。 　　 　　1　对象与方法 　　 　　1.1对象 　　采用多阶段随机抽样方法，在上海市卢湾区和松江区各随机抽取3个街道，每个街道随机抽取IlO户居民家庭，每户家庭要求抽取1名1980年以后出生、全程接种乙肝疫苗、未罹患病毒性肝炎的对象，共计600名符合条件的对象入选。经乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、抗－HBs和乙肝病毒核心抗体(抗－HBc)血清学检测，将HBsAg和抗－HBc阴性且抗－HBs10 mIU／mL的293名对象定义为乙肝表面抗体衰减组，将HBsAg和抗－HBc阴性且抗-HBs≥10 mIU／mL的307名对象作为人群对照组。 　　采用单纯随机抽样法，从乙肝表面抗体衰减组中随机抽取30名对象作为实验研究组，按照１：1配对原则，从人群对照组中随机抽取30名抗-HBs≥100 mIU／mL、性别相同、年龄±1岁的对象作为实验对照组。 　　 　　 　　1.2调查方法 　　上海市疾病预防控制中心统一制定调查问卷，内容包括调查对象的基本情况和可能导致乙肝表面抗体衰减的影响因素共18项内容。调查员由经过培训的市、区(县)疾控中心专业人员组成，采用入户调查方法收集信息。区(县)调查工作完成后，市疾控中心专业人员随机抽取10％的调查问卷，以电话方式进行质控，资料的符合率达到100％。 　　 　　1.3实验方法 　　HBsAg、抗－HBs和抗－HBc定性检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)，试剂由上海实业科华生物技术有限公司生产。阳性判断标准：HBsAg和抗－HBs的S／N≥2.1为阳性，抗－HBc抑制率≥50％为阳性。 　　抗－HBs定量检测采用美国雅培免疫系统，抗－HBs0～9.9 mIU／mL判为无(弱)应答，≥10 mIU／mL为保护水平，1000 mIU／mL为强阳性。 　　HBV－DNA荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测采用孟德尔的HBV PCR荧光检测试剂盒，ABI 7000荧光定量PCR仪。 　　细胞免疫功能测定：应用胞内因子染色流式细胞检测γ－IFN和IL-4。采集肝素钠抗凝的静脉血5 mL，分离外周血淋巴细胞(PBMC)按1：1与培养液(10％灭活胎牛血清RPMI 1640)混匀，细胞浓度维持在2×106／mL，加5μL BsAg标准品混匀后，37℃，5％二氧化碳培养12h，加2μL蛋白转运抑制剂莫能霉素(Monosin，1mg／mL，Sigma公司)，培养4 h。加细胞表面染色荧光标记的单抗试剂(Human CD3，PE－Cy5，Beckman公司)室温暗处孵育15 min。加入溶血素，室温暗处孵育10min。加固定剂，室温暗处孵育15 min，离心500 g，5 min，弃上清；加破膜剂(4％的多聚甲醛PBS溶液)室温暗处孵育10 min；加入3 mLPBS洗液，离心500 g，5 min，弃上清。加入荧光标记的细胞因子抗体(Human IL－4－PE，Human γ－IFN－FITC，Beckman公司)混匀，室温暗处孵育30 min；加入3 mL PBS洗液，离心500 g，5 min，弃上清；加入500 mL PBS上流式细胞仪计数。