乙酰胆碱与氯化钙制作Wistar大鼠心房颤动模型过程及体会.docVIP

乙酰胆碱与氯化钙制作Wistar大鼠心房颤动模型过程及体会 　　【摘要】房颤是世界范围内的多发病，伴随人们生活水平的提高，导致房颤的疾病谱已经有很大改变，如冠心病、高血压等所谓“富贵病”在房颤病因中所占比重逐年上升。房颤独立危险因素包括年龄、性别、吸烟、甲状腺功能亢进、糖尿病、心力衰竭、瓣膜性心脏病等[1]。然而无论房颤病因如何，房颤本身的并发症如脑栓塞、心力衰竭等正严重威胁着人类的生命和生活质量。近年来消融为房颤治疗带来新的曙光，然而其在持续性房颤中的治愈率仍然不容乐观。治疗的效果源于发病机制的明确。就实验动物学而言，目前世界范围内有多种动物模型制作方法。下面仅就乙酰胆碱和氯化钙在房颤动物模型制作中的作用做一分析。 　　【关键词】心房颤动；房室阻滞；室速；机制 　　1.房颤模型制作过程 　　1.1材料及试剂 　　wistar雄性大鼠（250-300g，长春市亿斯实验动物技术有限责任公司），氯化钙注射液（CaCl2，10ml：0.3g，国药集团容生制药有限公司），溴化乙酰胆碱（C7H16BrNO2，1g，沃凯），氯化钠注射液（0.9%，100ml），70%-75%乙醇溶液，10%水合氯醛溶液，温水（40℃），无菌棉球，无菌注射器（1ml、50ml），心电图仪，BL-420S生物机能实验系统（成都泰盟软件有限公司）。 　　1.2分组方法 　　1.2.1 wistar雄性大鼠5只，体重250-300g，每只大鼠尾静脉注射氯化钙（CaCl2）10mg/ml+乙酰胆碱（Ach）66ug/ml混合液，0.1ml/100g，每天1次，连续给药7天。 　　1.2.2 wistar雄性大鼠3只，体重250-300g，随机分为常规剂量组（0.1ml/100g）、中剂量组（0.15ml/100g）、大剂量组（0.2ml/100g），每只大鼠尾静脉注射相应浓度氯化钙（CaCl2）10mg/ml+乙酰胆碱（Ach）66ug/ml混合液，每天1次，连续给药14天。 　　1.3房颤判断标准 　　以正常P波消失，代之以形状、振幅、时限绝对不等的f波，频率约350-600次/分，RR间期绝对不等为房颤出现指征，以房颤持续≥7天，不恢复窦性心律为造模成功[2]。 　　1.4制作方法 　　大鼠腹腔内注射10%水合氯醛溶液（0.3ml/100g），待麻醉充分（呼吸平稳、角膜反射消失、疼痛刺激无反应）后，心电图仪连接肢体导联，40℃温水浸泡鼠尾约3分钟以软化角质层利于穿刺，70%-75%乙醇溶液消毒鼠尾，1ml注射器抽取氯化钙和乙酰胆碱混合液由远端及近端穿刺大鼠尾静脉，见到回血并推注无阻力时注射相应剂量混合液，以BL-420S生物机能实验系统全程记录大鼠心电图。 　　2.房颤模型制作结果 　　因实验全程未见典型房颤波（f波）出现，故在此就实验过程中出现的其他心律失常（图1-图4）如房室传导阻滞（二度Ⅰ型、Ⅱ型）、室性早搏、室性心动过速等做简要分析，以求进一步了解氯化钙和乙酰胆碱对房室除极及复极的影响。所有数据由SPSS23.0统计软件处理，组间比较采用Χ2检验。 　　2.1由表1可以看出，在给药剂量相同情况下，随着给药时间的延长，各型心律失常的发生率未见明显变化，但三种心律失常中，室早与室速发生率（P0.0125）无明变化，与室速（P0.00313）、室早（P0.00313）相比，以房室阻滞的发生率最高。其中第4天给药前发现死亡一只，其前一日给药后心电图示双向室速。 　　2.2在三种不同给药剂量情况下，随着给药时间的延长，相应剂量下各型心律失常的发生率亦无明显变化，但随着给药剂量的增加，室速（P0.5）、室早（P0.05）的发生率无明显改变。其中给药剂量0.15ml/100g组大鼠在实验第8天时因心室停搏死亡。详见表2。 　　2.3房室阻滞多在给药后1分钟内出现，个别可不出现，多为二度，可为Ⅰ型或Ⅱ型，以Ⅰ型多见，P波下传比例2：1-6：1不等，亦可见高度房室阻滞。此外房室传导恢复正常后随时间延长可见QRS-T波倒置且逐渐加深，因QT间期明显缩短ST段可不明显，但可见J点下移，约数秒可恢复正常。各组可出现各种室性心律失常，如单源性室早、多形性室早、成对室早、双向性室速、多形性室速，偶可见尖端扭转型室速及心室停搏，未见室颤发生，但相同给药剂量组死亡大鼠不除外室颤可能。各型室性心律失常多于房室传导及QRS-T波极性恢复正常后出现，亦可在下次给药前已经存在。此外 　　偶有大鼠亦可见轻微QRS-T波电交替，多在首次给药前已经存在，偶尔可在给药后出现，持续数秒钟不等。 　　3.讨论 　　目前房颤机制尚未明确，心房内多子波折返及局灶自律性增高可能是其房颤发生和维持机制。折返环周期大于其有效不应期是折返形成的前提，故缩短心房不应期可促进折