高通量便携式荧光检测装置研制与应用.docVIP

高通量便携式荧光检测装置研制与应用 　　1引言 　　荧光分析法由于灵敏度高、选择性好和操作简便等优点，在卫生检验、环境分析、食品分析、药物分析、生化与临床检验等领域广泛应用[1～7]。高通量、快速荧光检测系统因能将批量分析速度提高数倍至数十倍[8～12]，具有重要的经济和社会意义。商品化的单通道微孔板荧光仪[13～15]为实现高通量荧光检测提供了技术支持，具有检测速度快、灵敏度高、线性范围宽等优点。多通道荧光激发与检测相对于单通道荧光激发与检测具有更高的通量，可成倍提高检测速度[16，17]。微孔板的多通道荧光激发一般通过光分束镜实现激发光源的均分耦合多通道激发光纤传输[16]；多通道发射光的采集通过耦合多通道发射光纤传输[16，17]，检测或通过多个检测单元同时检测[16]，或通过一个检测单元顺序检测[17]得以实现。一般需要较为复杂的光学系统。 　　本研究对基于商品化一字线激光模组的多通道激发/荧光成像进行了研究，设计了一套结构简单、小巧轻便、成本低廉，具有多通道特点的高通量便携式荧光检测装置，结合自行研制的图像处理软件，实现了溶液的高通量定量检测。 　　2实验部分 　　2.1装置的设计与构建 　　装置的基本工作原理如图1所示：一字线激光模组发出线状激发光，将盛有待测溶液的排状微孔板置于线状辐射光路时，溶液受激发而发光，CCD数码相机采集经滤光片滤去背景光的荧光图像，图像经实验室自行研制的图像处理软件处理转化为荧光强度数据。装置的主要部件包括激发光源、CCD数码相机、图像处理软件、排状微孔样品板。 　　2.1.1激发光源激发光源采用商品化一字线激光模组。一字线激光模组是通过在激光点光源前安装一个鲍威尔棱镜（Powell lens），使激光束通过非球面透镜转化为光密度较为均匀、稳定性好、直线性好的一条直线。激光模组的波长分布从紫外到红外波段，通过更换激光光源，可实现对不同激发波长物质的检测。 　　2.1.2CCD数码相机 　　2.1.3图像处理软件图像处理软件ChemImageProcessor（CIP）为实验室自行研制，用于处理和分析荧光图像。CIP可以加载、显示荧光图像，并可以扫描图像上的每个荧光光斑，计算出每个光斑的总亮度，即荧光强度。 　　2.1.4排状微孔样品板排状微孔样品板为12孔/条×8条的白色96孔可拆微孔板（上海精睿公司），一次可进行12通道的同时检测。以手动更换微孔条更换检测溶液。也可配以电子机械移动实现自动化。 　　2.2化学试剂罗丹明B（RB）、氯金酸（HAuCl·4H2O）、柠檬酸三钠与硼砂（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；邻巯基苯甲酸（TSA，98%）与2，6吡啶二羧酸（PDCA，99%），购自百灵威公司；Hg单元素溶液标准物质（中国计量科学研究院）；实验用水为MilliQ（18 MΩ·cm）超纯水。邻巯基苯甲酸修饰纳米金（TSA@Au）的合成方法参考文献[18]。 　　2.3装置性能测试 　　以RB作为测试溶液，对装置的稳定性、精密度和灵敏度等主要性能参数进行评价。RB的激发和发射波长分别为λex=552 nm， λem=572 nm。激发光源选用M532UL5一字线激光模组（20 mW，532 nm，西安铭辉公司），发射光滤光片选用560 nm长波通滤光片（深圳激埃特公司）。 　　2.4水溶液中Hg2+浓度检测 　　在排状微孔样品板上依次加入一定浓度的TSA@Au和RB，不同浓度的Hg2+，用5 mmol/L pH 8.0硼砂缓冲液稀释至300 μL，超声混合均匀后，用本研究构建的高通量便携式荧光检测装置对其荧光强度进行测定。 　　2.5自来水和湖水样品中Hg2+浓度的加标回收实验 　　本实验室自来水龙头打开5 min后，采集自来水样。湖水样采自于厦门大学芙蓉湖表层湖水。水样分别经由0.22 μm的过滤膜过滤后， 存储于4 ℃的冰箱中待用。分别平行取3份145 μL自来水样或湖水样，在其中分别加入5 μL Hg2+标准溶液，Hg2+加标浓度分别为60、120和240 μg/L，按2.4节（稀释2倍）方法检测荧光强度。 　　3结果与讨论 　　3.1装置的特点 　　目前，商品化和文献报道的微孔板荧光仪的光路系统较为复杂，并且需要专业的精密调节[13～17]。本高通量便携式荧光检测装置具有如下特点：（1）易于搭建整套装置的光路系统简单，可方便快捷地搭建；（2）便携整套装置选用小型化器件组装，小巧轻便。整套装置的尺寸为225 mm×225 mm×230 mm， 重量约1 kg，便于携带，适用于现场快速检测；（3）成本低廉整套装置的成本约3000元；（4）多通道一字线激光模组是线状光源，辐照宽度与光源距样品的距离有关。样品距光源越远，激光线越长，辐照宽度越宽