乙肝抗HBc与抗HBe在ELISA法出现假阳性原因分析.docVIP

乙肝抗HBc与抗HBe在ELISA法出现假阳性原因分析 　　【摘要】 目的：探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝病毒血清抗-HBc与抗-HBe出现假阳性的影响因素，旨在提高乙肝检验结果的准确性。方法：对采用酶联免疫吸附试验检测出的血清阳性标本抗-HBc112例、抗-HBe118例，用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）方法进行复检，统计假阳性率，并分析出现假阳性的因素。结果：采用ELISA法检测出的血清阳性标本抗-HBc112例、抗-HBe118例，以TRFIA方法为基准复检后假阳性分别为11例、13例，ELISA法检测乙肝病毒抗-HBc假阳性率为9.82%（11/112）、抗-HBe假阳性率为11.02%（13/118）。结论：ELISA法检测乙肝抗-HBe和抗-HBc存在一定比例的假阳性率，除了ELISA方法学和试剂盒本身影响因素外，标本处理不好、实验操作不当也是导致其出现假阳性的主要原因。检验人员应严格操作，降低假阳性率；对于疑为假阳性的标本，应进一步用多种方法复检，以保证检验结果的准确性。 　　【关键词】 乙肝；抗-HBc；抗-HBe；酶联免疫吸附试验（ELISA）；时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）；假阳性；假阳性率。 　　 　　尽管目前乙肝病毒（HBV）感染的血清标志物检测方法较多，但在临床上应用最多的还是酶联免疫吸附试验（ELISA）［1］。ELISA方法操作简便、结果可靠，但是也存在一些问题，特别是乙肝5项检测中的e抗体（抗-HBe）、核心抗体（抗-HBc）易出现假阳性［2~3］，影响了检测结果的准确性。本文采用两种方法对112例抗-HBc阳性、118例抗-HBe阳性血清标本进行了对比性检测，旨在探讨ELISA检测乙肝病毒血清抗-HBe与抗-HBc出现假阳性的影响因素，提高乙肝检验结果的准确性。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源 本组用ELISA法检测出的112例抗-HBc阳性、118例抗-HBe阳性血清标本来自新乡市传染病医院2010年6月~2012年1月923例门诊和住院的肝病病人，其中男 512例，女411例；年龄17～80岁，平均45.5±7.5岁。 　　1.2 方法 　　1.2.1 仪器与试剂 ELISA法使用的仪器为北京普朗新技术公司酶免仪以及配套洗板机，测定试剂由上海科华和山东3v生物工程股份有限公司提供，通过卫生部批检，并贴有防伪标签。时间分辨荧光免疫分析方法（TRFIA）检测使用上海新波生物技术有限公司生产的EFFICUTA全自动标本前处理系统及ANYTEST时间分辨荧光检测仪，测定试剂由上海新波生物技术有限公司提供，通过卫生部批检，并贴有防伪标签。 　　1.2.2 检测方法 抽取病人空腹静脉血3~5mL，入干燥试管或者促凝分离胶密封试管内，37℃放置待凝固后，离心分离血清后1~2h内检测。先用ELISA法（上海科华试剂盒）检测，检测前严格按照说明书将试剂盒在室温下平衡30min，对血清标本同时检测乙肝5项指标，将检测出的抗-HBe、抗-HBc阳性的标本，再次用山东3v试剂盒复检，最后将2次检测均为阳性的血清标本，用TRFIA方法（上海新波配套仪器及试剂）进行复查，以TRFIA方法为基准复检后排除的阳性为假阳性。 　　1.2.3 判断标准 ELISA法与TRFIA法均严格按说明书由固定主管检验技师操作。ELISA法阳性结果判定：按酶标仪结果判读阴阳性，抗-HBc、抗-HBe以抑制率50%判阳性，对弱阳性结果均须2孔复查，仍为阳性者判为阳性。TRFIA法阳性结果判定：超过下述参考范围上限，判为阳性，否则为阴性，TRFIA法检测结果参考范围：抗-HBe 0-0.2PEIU/mL、抗-HBc、0-0.9PEIU/mL。 　　1.2.4 质控 所用检测试剂均通过卫生部批检，试剂和质控血清均在有效期内使用。全部仪器、设备运行状况良好，每日质控结果、每批测定阴阳对照均在可信范围，乙肝5项每次参加河南省临检中心质控均合格。 　　2 结果 　　923例肝病病人的血清标本用ELISA法检测出抗-HBc阳性112例、抗-HBe阳性118例，以TRFIA方法为基准复检后抗-HBc阳性101例、抗-HBe阳性105例，假阳性分别为11例、13例， ELISA法检测乙肝病毒抗-HBc假阳性率为9.82%（11/112）、抗-HBe假阳性率为11.02%（13/118）。 　　3 讨论 　　酶联免疫吸附试验（ELISA） 检测乙肝病毒抗-HBe、抗-HBc采用竞争法，标记或结合物分别是抗-HBe和抗-HBc［4］，检测结果以不显色为阳性，较采用夹心法的其他3项更易出现假阳性［5］，国内文献认为［6~7］标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、试剂盒的抗原和酶结