超声波―SDS协同提取鸡蛋花总黄酮及其清除自由基能力的测定.docVIP

超声波―SDS协同提取鸡蛋花总黄酮及其清除自由基能力的测定 　　摘要：采用超声波-SDS协同体积分数70 %的乙醇提取鸡蛋花总黄酮，通过单因素试验和正交试验确定最优提取工艺参数为：SDS浓度3.0 CMC（3.0×8.2 mmol/L），提取时间25 min，液料比25∶1（mL/g），在此条件下鸡蛋花总黄酮得率为1.59±0.061 %。对鸡蛋花总黄酮清除DPPH?、?OH及O-2 ?三种自由基能力进行了测定，结果表明，鸡蛋花总黄酮具有良好的自由基清除效果，其中对?OH清除率最高，三种自由基清除率随总黄酮浓度增加而增大。研究结果可为鸡蛋花黄酮类物质的开发提供参考。 　　关键词：鸡蛋花；总黄酮；超声波；提取；自由基清除 　　中图分类号： TS202.3 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.03.009 　　鸡蛋花，又名蛋黄花、擂捶花、大季花，系夹竹桃科植物鸡蛋花（Plumeria rubra L. var. acutifolia，别名缅栀子），原产南美，在中国主要分布于广东、福建、广西及云南等地区[1]。鸡蛋花富含黄酮类、萜类等多种活性成分，具有抗焦虑、抗菌及抑制HIV病毒等生物功能[2]。此外，鸡蛋花作为中药材，具有清热祛湿、润肺解毒、止咳化痰等药理作用[4]。目前，关于鸡蛋花的研究主要集中于鸡蛋花挥发油化学成分的分析检测方面[1-3]，而关于鸡蛋花黄酮类成分的抗氧化研究未见报道。 　　黄酮类化合物因其显著有效的抗氧化活性而一直作?檠芯恐氐悴⒈还惴河糜谑称贰⒁┢贰⑷栈?等领域。醇提法操作简单、工艺成熟，是目前提取黄酮类化合物的常用方法。当辅以超声波时，超声波可通过空化效应破坏植物细胞壁及细胞膜，使溶剂向细胞内扩散并促使胞内有效成分溶出，因而可缩短提取时间[11]。另外，表面活性剂能降低溶剂与植物组织之间的表面张力，使植物组织被充分浸润，加速溶剂深入组织内部，促进活性成分溶出[5]，如阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS）在黄酮类化合物提取方面具有明显的增效作用[6]。 　　本研究采用超声波-SDS协同醇提法提取鸡蛋花总黄酮，通过单因素试验和正交试验优化提取工艺参数，并对鸡蛋花总黄酮清除自由基能力进行测定，从而评价其抗氧化活性。本研究所建立的工艺方法可为植物黄酮类物质的高效提取提供参考，同时，研究结果为后期鸡蛋花黄酮类化合物单体的分离、鉴定以及单体抗氧化活性的测定奠定了基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　鸡蛋花：洗净、烘干、粉碎后装袋备用。 　　芦丁标准品：中国药品生物制品检定所，纯度99.1%。芦丁标准液（0.2mg/mL）的配制：称取10.0mg芦丁标准品，加体积分数95%的乙醇溶解，于50mL容量瓶中定容并摇匀。 　　1， 1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）： 美国Sigma公司；SDS、乙醇、邻苯三酚、水杨酸、Al（NO3）3、NaNO2、FeSO4、H2O2、NaOH、Na2S2O3、三羟甲基氨基甲烷（Tris）等试剂均为国产分析纯。 　　1.2 仪器与设备 　　U-3010紫外可见分光光度计：日本HITACHI公司；202-3电热恒温干燥箱：郑州宏朗仪器设备有限公司；KQ-250台式超声波清洗器：苏州江东精密仪器有限公司；5417C高速冷冻离心机：德国Eppendorf公司；FW100高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；HH-8数显恒温水浴锅：金坛市精达仪器制造厂；AL104电子天平：梅特勒―托利多（上海）有限公司。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 鸡蛋花总黄酮提取 称取2.0 g鸡蛋花粉末置于体积分数70 %的乙醇中，加入SDS，然后超声（300 W）提取总黄酮。提取液离心（5000 r/min，10min）后取上清并定容至100mL，测定总黄酮质量，由下式计算总黄酮得率： 　　得率（%）=（m/W）×100 　　式中，m为总黄酮质量g；W为鸡蛋花粉末质量g。 　　1.3.2 总黄酮含量测定 参考马祥[7]等的方法并作改进。吸取1.0 mL上清样品于10mL标准比色管，加体积分数60 %的乙醇至5.0mL；加0.3mL 50 g/L的NaNO2溶液，摇匀静置6 min；加0.3mL 100g/L的Al（NO3）3溶液，摇匀静置6min；加4.0mL 40g/L的NaOH溶液，用蒸馏水稀释至10 mL，静置20 min后倒入比色皿，在波长510nm处测定吸光度。以芦丁标准液为对照，依据标准曲线（y =7.78x + 0.0036，R2 = 0.9982，其中y为吸光度，x为芦丁质量浓度，mg/mL）求得样品中总黄酮质量并计算出得率。 　　1.3.