食品中菌落数及大肠菌群检测课件.pptVIP

Page ? * * * * * * * * * * * * 食品检测 第四小组成员： 邱欢欢、许小雪、吴湃泳、王子维、谭穗芳、钟思杰 相关食品质量标准 理化指标： 微生物标准是 菌落总数≤1000cfu/g 大肠菌群≤40MPN/100g 食品微生物常规检验内容与步骤 菌落总数 样品 感官观察 大肠杆菌数目 菌落总数的测定 一、实验目的 （1）学习并掌握标准平皿活菌计数的基本原理和方法 （2）明确菌落总数测定对被检样品进行卫生学评价的意义。 二、 实验原理 微生物活体数量的测定方法，常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，再取一定的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内，最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克（或mL）样品中的活菌数量。 （1）以无菌操作，将检样包装打开，用无菌的电子天平两取15g西卖营养麦片，放于含有135ml灭菌生理盐水的灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液，取上清稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10（10-1）上清稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100（10－2）的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。 （4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10－1 10－2 10－3 分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿，并且做一个空白对照。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。 五、检样中细菌菌落总数的计算与报告 菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。（一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数。） 六、实验结果与记录 七、分析与讨论 大肠菌群测定 大肠菌群是指一群能在37℃培养24h内发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。   大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语。它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。其中主要包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等。  分布：分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。  大肠菌群是作为粪便污染指标提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，也反映了对人体健康危害性的大小。  大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生检测工作中。 大肠菌群概念： 一、实验材料：西麦特浓牛奶营养燕麦片二、培养基和试剂：伊红美蓝培养基（EMB培养基）乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管生理盐水、革兰氏染液三、实验器材：温箱：36±1℃、冰箱：0～4℃、恒温水浴：44.5±0.5℃、天平、显微镜、平皿：直径为90mm、试管、微量移液器、广口瓶或三角烧瓶：容量为500mL、玻璃珠：直径约5mm、载玻片、酒精灯、试管架。 一、大肠菌群检验方法?　　（一）检样稀释?　　１．以无菌操作将检样15ｇ放于含有135ｍｌ灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内充分振摇做成10-1的均匀稀释液。?２．用微量移液器吸取10-1稀释液上清液１ｍｌ，注入含有９ｍｌ灭菌生理盐水试管内，振摇试管混匀，做成10－2的稀释液。?３．另取１ｍｌ灭菌吸管