209例儿童血清HBV标志物和HBV DNA检测分析.docVIP

209例儿童血清HBV标志物和HBV DNA检测分析 　　[摘要] 目的:探讨儿童乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物与HBV-DNA含量的关系。方法:采用酶联免疫法(ELISA)对收集到的209份血清进行HBV M检测,再应用荧光定量PCR法进行HBV-DNA含量检测。结果:209份血清标本中129例(61.7%)HBV DNA阳性。HBV DNA阳性率在HBV M模式1(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+)、模式2 (HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+)、模式3(HBsAg+、HBcAb+)及模式4(HBsAb+、HBeAb+/- 、HBcAb+)中分别为96.5%、35.2%、45.7%、14.3%,各组比较,有显著性差异(χ2=88.556,P=0.000)。结论:儿童乙肝患者的多种血清标志物模式中都存在HBV-DNA复制,以HBeAg阳性者HBV-DNA复制水平最高。 　　[关键词] 乙型肝炎病毒;HBV DNA;ELISA;荧光定量PCR 　　[中图分类号] R725.1 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2010)04(c)-254-02 　　 　　乙型肝炎病毒感染是世界最严重的公共卫生问题之一,我国是乙型病毒性肝炎的流行大国,乙型肝炎病毒表面抗原携带者实际人数超过1.2亿,病毒性肝炎及相关性肝病如肝硬化(LC)、肝癌(HCC),是严重危害我国人民健康的常见病[1]。儿童时期感染HBV者,大多数转变为慢性感染[2],并在以后可能发展为肝硬化和肝细胞癌,对其今后生长发育和身心健康都会带来很大的影响,因此HBV感染的快速、敏感的诊断方法,将显著影响慢性HBV感染的流行及其不良后果的发生。为此,笔者检测了吕梁市209名感染儿童HBV血清学模式和HBV DNA含量,以评价血清标志物和DNA检测在儿童HBV感染中的诊断价值,现报道如下: 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 　　209例血清标本采自吕梁市离石区中医院和地区医院儿科2007年1月~2009年10月住院及门诊HBV感染者,其中,男132例,女77例,年龄为0.5~12岁,平均(7.3±2.6)岁。无菌收集患者血清标本并置-80℃冰箱中贮存备用。 　　1.2 方法 　　1.2.1 血清标志物检测使用上海科华生物工程公司试剂盒(酶联吸附免疫法)检测所有血清标本HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb。 　　1.2.2 HBV DNA检测 HBV DNA 定量检测试剂来自深圳匹基生物工程股份有限公司, 采用BIO-RAD i-Cycler荧光定量PCR检测仪进行检测。荧光PCR循环程序设置如下:37 ℃,5 min;94 ℃,1 min;95 ℃,5 s;60 ℃,30 s;42 个循环;40 μl 反应体系;60℃收集荧光信号,荧光信号收集时设定为Fam荧光素。检测理论极限:125 copies/ ml,实验采用阳性截止值为≥500 copies/ml 。 　　1.3 统计学处理 　　采用SPSS12.0对所得数据进行统计分析,计数资料采用卡方(χ2)检验,所有数据以均数±标准差表示,显著性检验水准为P0.05。 　　2 结果 　　209份标本根据HBV血清标志物(HBV M)阳性模式可分为四组,其中模式1(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+)85例,模式2 (HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+)71例,模式3(HBsAg+、HBcAb+)46例,模式4(HBsAb+、HBeAb+/- 、HBcAb+)7例。HBV DNA阳性率在模式1、模式2、模式3、模式4分别为96.5%、35.2%、45.7%、14.3%。各组比较,有显著性差异(χ2=88.556,P=0.000),见表1。 　　 　　表1 HBV M感染模式与HBV DNA阳性率的关系 　　 　　3 讨论 　　乙肝血清标志物(HBV-M)的检测是临床诊断乙型肝炎病毒感染及病程发展的准确而可靠的依据,也是诊断乙型肝炎的重要指标,但主要反映人体对HBV感染的免疫状态,没有直接反映HBV在患者体内的复制情况,更不能作为判断患者是否具有传染性的直接证据;而PCR则可以准确反映出HBV-DNA的复制水平、病程变化和治疗恢复情况等。PCR法检测HBV-DNA直接反映病毒存在、活动性复制及具有传染性的可靠指标,使得临床医生对于乙肝患者体内的HBV的复制以及传染性有了更直接的了解,从而也更有利于临床HBV感染的诊断、治疗方案选择及疗效的判断。本研究HBV DNA阳性率在模式1(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+)、模式2 (HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+)、模式3(HBsAg+、HBcAb+)、模式4(HBsA