小菜蛾类钙粘蛋白片段的原核融合表达载体构建及其条件优化-中国蔬菜.PDF

中国蔬菜　2013（14）：39-45 CHINA VEGETABLES 小菜蛾类钙粘蛋白片段的原核融合表达载体 构建及其条件优化 郑晓旭 1，2　杨峰山 1　朱　勋 2　张友军 2* 1 2 （ 黑龙江大学生命科学学院，微生物黑龙江省高校重点实验室，黑龙江哈尔滨 150080 ； 中国农 业科学院蔬菜花卉研究所 ，北京 1 00081） 摘　要：构建了小菜蛾钙粘蛋白片段基因的重组载体，为提高其在大肠杆菌中的表达量，研究了时间、 温度、IPTG 浓度对融合蛋白表达量以及可溶性的影响。结果表明，使用 LB 培养基 37 ℃培养 1.5 h 后，采 用终浓度为 0.1 mmol·L-1 的 IPTG，在 25 ℃ 180 r·min-1 诱导培养 36 h 融合蛋白的表达量最大，并且温 度的改变对融合蛋白的可溶性几乎没有影响，SDS电泳检测结果表明，融合蛋白的分子质量与预计 大小一致，约为 16 kDa。 关键词：小菜蛾；钙粘蛋白；原核表达；优化 中图分类号：S481+ .4　　文献标识码：A　　 文章编号： 1000-6346（2013）14-0039-07 Prokaryotic Expression Vector Construction of Plutella xylostella Cadherin Fragments and Optimization of Its Conditions 1，2 1 2 2* ZHENG Xiao-xu ，YANG Feng-shan ，ZHU Xun ，ZHANG You-jun 1Key Laboratory of Microbiology of Heilongjiang Province College of Life Science Heilongjiang University （ ， ， ， Harbin 150080 ，Heilongjiang ，China；2Institute of Vegetables and Flowers ，Chinese Academy of Agricultural Sci- ences，Beijing 100081 ，China ） Abstract ：In this study，we constructed a recombinant of Plutella xylostella cadherin gene fragment．In order to enhance its expression in Escherichia coli ，we studied the effect of time， temperature and IPTG concentration on fusion protein expression and its solubility．The results showed that the fusion protein gave rise to the maximum expression when host cells were cultured in LB at 37 ℃ for 1.5 h and then induced by 0.1 mmol·L-1 IPTG at 25℃ 180 r·min-1 for 36 h．And the temperature change had little impact on the solubility of fusion proteins. SDStest also indicated that the molecular weight of fusion proteins was the same as expected，which is about 16 kDa. Plutella xylostella Key words ： ；Cadh