烟草土壤微生物和土壤酶活性分析.docVIP

烟草土壤微生物和土壤酶活性分析 　　摘要：从湖北省恩施咸丰县烟田采集烟草（Nicotiana tabacum L.）不同生长时期的土壤样品，采用稀释平板涂布法进行细菌、放线菌、氨化细菌、硝化细菌、真菌的分离并对土壤蔗糖酶、脲酶、磷酸酶、过氧化氢酶进行酶活性的测定。试验结果表明，①土壤中氨化细菌数量最多，真菌数量最少。各种类群微生物在烟草整个生育期间变化波动较大，不同类群微生物消长趋势不同，整体呈上升趋势；其中，烟草生长旺盛期微生物数量最多。②在烟草生长前期，土壤脲酶活性较高；磷酸酶活性在前、中期均处于比较高的水平；在后期，随着土壤熟化程度的提高，蔗糖酶活性增强较明显；过氧化氢酶活性在各个时期的变化较平稳。 　　关键词：烟草（Nicotiana tabacum L.）；土壤微生物；土壤酶活性 　　中图分类号：S572 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4229—04 　　烟草（Nicotiana tabacum L.）是一种特殊的叶用经济作物，其生长发育和质量形成与土壤生物学特性和生态环境有着密切的关系。土壤微生物是土壤的重要组成部分，它对土壤肥力的形成和植物营养的转化起着积极的作用[1]。土壤微生物种类、数量可以作为评价土壤肥力的指标[2]。土壤酶活性与土壤微生物类群密切相关，土壤酶活性反映了土壤微生物群落的代谢状况。土壤微生物和土壤酶既是土壤有机物转化的执行者，又是植物营养元素的活性库[3]。此外，酶是土壤组分中最活跃的有机成分之一，土壤酶活性反应了土壤的生物学活性。研究烟草土壤中微生物类群和数量以及土壤酶活性随着烟草不同生长时期的变化动态有助于分析影响烟草生长发育的土壤生态因子。本试验对湖北省恩施咸丰县烟田不同生长时期的土壤微生物进行分离，并对土壤酶活性进行测定，分析了土壤微生物数量和土壤酶活性在烟草不同时期的差异和变化动态，探索土壤微生物、酶活与烟草生长的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试样品采自湖北省恩施咸丰县高乐山镇小模村烟田。土壤类型为黄棕壤，质地疏松，通透性好。年平均气温15～17 ℃，年降水量为1 300～1 500 mm，相对湿度80%。栽培烟草品种为云烟87，使用肥料为烤烟专用复合肥。供试细菌、放线菌、真菌、氨化细菌、硝化细菌所用培养基分别为LB培养基、高氏一号培养基、PDA培养基、蛋白胨氨化培养基、硝化细菌培养基。供试仪器为720型分光光度计、恒温培养摇床、恒温培养箱。供试试剂为0.3%过氧化氢、3，5—二硝基水杨酸、蔗糖、磷酸苯二钠、4—氨基安替吡啉、钾铝矾等。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 采样方法 分别在烟草施用基肥前1 d（移栽前）、移栽当天，移栽后15、30、45、60、75、90 d和采收完毕后采集土样，共9次。挖取烟株之间垄上土壤耕层0～20 cm表层、中层和底层的土壤，混匀，用保鲜袋装好，贴好标签。 　　1.2.2 样品处理 土样采回后立即对土壤微生物进行分离。用于土壤酶活性测定的土样及时风干、过筛，放置于室温保存。 　　1.2.3 测定方法 　　1）土壤微生物的分离及数量测定。采用稀释涂布平板法进行土壤微生物的分离[4，5]。称取10 g土壤样品，放入90 mL无菌水中，搅拌均匀。将土壤悬液进行10倍系列梯度（10—3、10—4、10—5、10—6、10—7）稀释，吸取不同稀释浓度的土壤悬液进行各种微生物的分离。将分离培养的细菌放入37 ℃培养箱中培养2 d；放线菌放入28 ℃培养箱中培养7 d；氨化细菌放入28 ℃培养箱中培养5 d；硝化细菌放入28 ℃培养箱中培养7 d；真菌放入28 ℃ 培养箱培养7 d。菌落数量采用平板菌落计数法，每个稀释度做3次重复。计算公式：微生物数量（CFU/g）=同一稀释度3次重复平均菌落数×稀释倍数×100。 　　2）蔗糖酶活性的测定。采用3，5—二硝基水杨酸比色法[6，7]。以蔗糖为基质，根据酶促产物葡萄糖与3，5—二硝基水杨酸生成有色化合物3—氨基—5—硝基水杨酸的量进行比色测定。同时做标准曲线、无基质对照和无土壤对照试验。蔗糖酶活性（mg/g）以24 h后每克土样所产生葡萄糖的质量来表示。 　　3）脲酶活性的测定。采用比色法[6，7]。以尿素为基质，酶促水解后生成的氨在强碱性溶液中与苯酚钠及次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，以其生成数量与氨浓度成正比来进行定量分析。同时做标准曲线、无基质对照和无土壤对照试验。土壤脲酶活性（mg/100 g）以100 g土中NH3—N的含量表示。 　　4）磷酸酶活性的测定。采用磷酸苯二钠比色法。其原理是磷酸苯二钠作为基质被土壤磷酸酶水解后生成酚，测定酚的质量即可确定磷酸酶的活性[6，7]。磷酸酶活性（mg/g）以每克风干土壤中的酚含量来表示。 　　5）过氧化氢