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咳喘贴敷膏微生物限度检查的方法验证 　　摘要：药品的卫生质量直接关系到药品的用药安全，本文按2010年版药典要求对咳喘贴敷膏微生物限度检查方法进行了验证，确立了医院制剂咳喘贴敷膏微生物限度检查方法。 　　关键词：咳喘贴敷膏微生物限度 检查方法验证 　　【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）10-0574-02 　　2010年版《中国药典》规定，当进行产品的微生物限度检查时应进行方法验证，以证明所采用的方法适合于该产品的检验。药品中存在抑菌成分时，在抑菌成分的作用下其微生物检查的结果会受到干扰，出现假阴性结果。特别是抑菌药物中污染的微生物，在一定条件下是可以稳定存在一段时间，虽然它们可能受到损伤，但未死亡，在条件改变时，如服用至人体内，条件适宜时便可复苏并繁殖，对人体健康造成危害。因此，进行微生物限度检查时，不能仅靠直接接种对微生物进行检验，而必须依靠检验手段，除去药品中的抑菌成分，保留微生物存在于正常环境，检验出真正的结果。无论是否有抑菌性成分都要进行微生物限度检查方法学的验证，以保证该检验方法不影响检验结果，适用于该产品的检验。 　　咳喘贴膏由白芥子、甘遂、细辛、天南星等八味药材粉碎成细粉，用鲜姜汁适量，调成糊状。原料中白芥子有豁痰利气、温经除寒的作用，甘遂有泻水逐饮，消肿散结的作用，天南星外用有散结消肿的作用，生姜有驱寒的作用，综合以上因素推断，该贴膏存在抑菌的可能性，因此，证明咳喘贴膏正确的微生物限度检查方法是十分必要的。 　　按《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅢC微生物限度检查法，对咳喘贴敷膏进行了方法验证，归纳总结如下： 　　供试品：咳喘贴敷膏，批号：121201，130312 　　1 试验材料及仪器 　　1.1 仪器。 　　SCIENTZ-09拍打式均质器（宁波新芝）。 　　SPX-150生化培养箱（上海慧科电子）。 　　GHP-9162电热恒温培养箱（上海慧科电子）。 　　LRH-150霉菌培养箱（上海和呈仪器制造有限公司）。 　　电动离心沉淀机（江苏省金坛市金城国胜实验仪器厂）。 　　JY2002电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）。 　　BHC-1300IIA2生物安全柜（苏州安泰空气技术有限公司）。 　　1.2 试剂及培养基。 　　营养琼脂培养基 批号 　　甘露醇氯化钠琼脂培养基 批号 　　胆盐乳糖培养基 批号：1203212 　　溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 批号120503 　　改良马丁培养基 批号：110627 　　上述培养基由北京奥博星生物技术有限公司和青岛高科园海博生物技术有限公司提供。 　　1.3 试验菌株。 　　金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501] 　　大肠埃希菌[CMCC（B）44102]白色念珠菌[CMCC（F）98001] 　　乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094]黑曲霉[CMCC（F）98003] 　　铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104] 　　上述菌株由中国食品药品检定研究院提供。 　　2 试验部分 　　2.1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。 　　2.1.1 菌液制备。 　　2.1.1.1 取经30～35℃培养。18～24小时大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的肉汤培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100 cfu的菌悬液。 　　2.1.1.2 取经23～28℃培养。24～48小时的白色念珠菌改良马丁培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。 　　2.1.1.3 取经23～28℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数为50～100cfu的孢子悬液。 　　2.1.2 供试液制备：称取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠―蛋白胨缓冲液至100ml，作为1∶10的供试液。 　　2.1.3 试验方法。 　　2.1.3.1 药典常规法，取1ml供试液注皿，分别加入五株试验菌，测定回收率。 　　2.1.3.2 培养基稀释法，取0.2ml供试液注皿，分别加入五株试验菌，测定回收率。 　　2.1.4 回收率测定。 　　2.1.4.1 试验组：按常规法或培养基稀释法取规定量供试液和50～100cfu试验菌注皿，平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。 　　2.1.4.2 菌液组：测定所加的试验菌数，平行制备2个平皿。 　　2.1.4.3