发酵法生产虫草素的研究进展.docVIP

发酵法生产虫草素的研究进展 　　综述液体和固体发酵法生产虫草素的研究状况，并展望其发展趋势。 　　蛹虫草; 虫草素; 发酵 　　 　　虫草素在自然界中被发现仅存在于虫草属(??Cordyceps??)真菌中，其中蛹虫草（??Cordyceps militaris??）中含量较高，是目前生产虫草素的主要菌种。蛹虫草（??C. militaris??）是中国传统药用真菌中的一种，属子囊菌门（Ascomycota），肉座菌目（Hypocreales），虫草菌科（Cordycipitaceae），虫草属（??Cordyceps??［1］。现代医药学研究证明，蛹虫草中含有虫草素、虫草酸和虫草多糖等多种有效成分，用于肺结核、老人虚弱和贫血等疾病的治疗。虫草素对DNA和RNA合成，hnRNA和mRNA转录后修饰以及腺苷酸环化酶等均具有抑制作用，具有抗炎、抗真菌、抗癌及抗病毒等多种生理活性［2］。虫草素在美国已进入临床实验研究，用于白血病的治疗。?? 　　近几年随着对虫草素的深入研究，人们对虫草素的需求也逐渐增多，虫草素的来源有人工合成或天然来源提取2个途径。人工合成过程复杂且产量极低，且会产生毒副产品［3］，目前虫草素主要来源于天然材料的提取。虫草素的大量制备，将为虫草素的药理活性、临床药理学研究以及化学修饰等奠定基础，笔者对近年来发酵法生产虫草素的研究进行综述。?? 　　1 液体发酵法 　　国内外虫草素主要通过液体发酵制备，蛹虫草液体发酵的菌丝体和培养基中都含有虫草素，其中液体培养基中的虫草素含量高于菌丝体中的含量，国内外学者主要从培养基质、培养条件和菌种等方面加以优化，从而使菌丝体或培养基中虫草素含量提高。?? 　　1.1培养基的优化 　　1.1.1碳源 　　MAO等比较了乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、木糖作为碳源对虫草素产生的影响，发现葡萄糖为碳源时虫草素产量最高，达到262.7 mg/L；半乳糖作为碳源时，菌丝体长势最好；葡萄糖的浓度为40 g/L时虫草素的产量最高，超过55 g/L时对虫草素的合成反而不利 ［4］。FANG 研究发现高渗透压的培养条件不影响菌丝生长，但可能影响次级代谢产物的合成，不利于虫草素合成［5］。MASUDA等对葡萄糖与虫草素的关系进行研究发现，随着发酵液中的葡萄糖含量下降，虫草素的量开始增加，葡糖糖全部消耗完时，菌丝体出现自溶，但虫草素的含量仍有所提高［6］。?? 　　1.1.2氮源 　　MAO等同时还比较了水解酪蛋白、酵母提取物、蛋白胨、尿素及多种无机氮源对虫草素产生的影响，发现蛋白胨是最利于虫草素合成的氮源［4］，与蛋白胨可在胞内被蛋白酶分解成各种氨基酸被菌丝体利用有一定关系。不同的氨基酸在细胞生长和次生代谢物合成中起不同作用，研究表明酵母提取物和蛋白胨的混合物也是虫草素生产的较好氮源，酵母提取物和蛋白胨的比例为3∶1，虫草素产量可以达到最大；不同碳氮比对虫草素的产量也有影响，当氮源总量为10 g/L时，葡萄糖的量达到20 g/L，虫草素产量最高，并且当碳氮比保持不变，提高碳氮源的总量仍然可以提高虫草素的量［6］。?? 　　1.2培养条件 　　1.2.1pH值 　　培养基的pH值影响真菌的生长代谢，HSIEH等研究发现酸性条件下更适合次级代谢产物的合成［7］；对不同pH值的培养液中虫草素含量进行测定发现，pH值为4时，虫草素的产量最高［8］。?? 　　1.2.2培养液高度 　　MASUDA等比较了不同培养液高度对虫草素分泌的影响，发现培养液高度为1.8 ～5.3 cm时，随培养液高度的降低，虫草素含量提高［6］。?? 　　1.2.3培养方式 　　供氧在细胞生长和次生代谢产物合成中起重要作用，SHIH等发现最适合虫草素分泌的培养方式是振荡培养8 d和静置培养16 d相结合，该方式下虫草素含量比单纯振荡培养或静置培养要高［8］。?? 　　1.2.4转速 　　摇床转速影响深层液体培养时发酵液中的溶氧量，因此也会影响真菌的生长和代谢产物的形成。为考察适合蛹虫草生产虫草素的摇床转速，杜连祥等比较了100、125、150、175、??200 r/min等不同转速对虫草素产量的影响，发现适于虫草素分泌的最佳摇床转速为??150 r/min［9］。?? 　　1.2.5培养温度 　　温度影响细胞的酶活和发酵液的溶氧量，很多虫生真菌的最适生长温度都在20～30 ℃之间，对发酵培养的不同温度进行比较发现，适于蛹虫草菌丝体生长的最佳温度为 22 ℃，而产生虫草素的最佳温度为25 ℃［10］。?? 　　1.3外源添加物 　　1.3.1嘌呤类似物 　　MASUDA等在向培养基中添加腺苷后，虫草素的产量较未添加增加了15%，含量达到??8.6 g/L ［10］。MAS