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地锦组织培养及无性系建立的研究 　　摘要以生长旺盛的地锦嫩茎为材料,进行了愈伤组织的诱导和分化、不定芽的分化及试管苗的生根、移栽、扦插和移植的研究,结果证明:MS+BA 0.4~0.6mg/L+2,4-D 1.5~2.0mg/L是诱导嫩茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基;MS+AgNO3 0.8mg/L+BA 0.6 mg/L+NAA 0.1mg/L是诱导愈伤组织分化培养的理想培养基;B5+BA 0.5mg/L+ NAA 0.1mg/L是不定芽分化培养的理想培养基;B5+IAA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L是试管苗生根继代培养的理想培养基;移植的试管苗具有生长旺盛整齐、根系发达、开花结果时间推迟15d左右的特点。 　　关键词地锦;愈伤组织;不定芽;培养基 　　中图分类号 S567.21+9 文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)21-0077-02 　　 　　地锦(Euphorbia humifusa)又称地锦草、铺地锦、地锦大蓟,属于大蓟科大蓟属一年生草本植物,生长于荒地、路旁或田间[1,2]。除了广东、广西外,全国各地均有分布。地锦全草均可入药,具有清热解毒、凉血止血、利湿、消肿、退黄等功效,能治急性痢疾、肝毒赤白、肝炎、黄疸、咳血、尿血、便血、外伤出血、跌打损伤、热毒疮疼等疾病;外用能治跌打肿疼、皮肤湿疹、下肢溃疡、毒蛇咬伤等[3,4]。由于地锦具有多种药用价值,近年来人们进行广泛地采收,导致这种野生植物资源迅速减少。虽然现在已有大戟科药用植物组织培养研究的报道[5,6],但迄今未见地锦组织培养、无性系建立研究的报道。为保护地锦,满足人们需要,笔者对其进行了组织培养及无性系建立的研究。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料及灭菌 　　6月中旬,把大连郊区农田中生长非常旺盛的地锦采回来后,将嫩茎剪下,放到250mL的磨口广口瓶中,流水冲洗15min左右,用0.05%安利洗涤液振荡洗涤约10min,再用蒸馏水洗至无泡沫时移至超净工作台上;倒入70%~75%乙醇灭菌约10s,迅速用无菌水洗涤1次,再用0.05% HgCl2溶液振荡灭菌16min,接着用无菌水振荡洗涤5次。再将无菌嫩茎切成长约0.3cm的茎段,接种到相应的固体培养基上,进行培养观察。 　　 　　1.2培养条件 　　以MS和1/2MS为基本培养基,附加不同浓度的细胞分裂素和生长素。以MS为基本培养基时,加蔗糖30g/L;以1/2MS为基本培养基时,加蔗糖15g/L;培养基胨力强度为180g/cm2[7],pH值5.8~6.0,培养温度20~28℃,光照12h/d,光照度2 500Lx左右。 　　 　　1.3试验方法 　　1.3.1愈伤组织的诱导。将无菌茎段接种到以MS为基本培养基,附加不同浓度的BA、IBA、2,4-D和IAA的培养基上,进行嫩茎愈伤组织的诱导培养。每处理接种100个茎段,重复4次。接种培养60d观察统计。 　　1.3.2愈伤组织的分化。把上述继代培养的愈伤组织分散成独立的颗粒状后,接种到以MS+ AgNO3 0.8mg/L为基本培养基,附加不同浓度的BA、IBA、NAA的培养基上进行愈伤组织的分化培养。每处理接种100个愈伤组织颗粒,重复4次。培养50d观察统计。 　　1.3.3不定芽的分化。把上述分化培养的不定芽从基部切下,分别接种到以MS+BA 0.5mg/L、1/2 MS+BA 0.5mg/L、1/3 MS+BA 0.5mg/L、B5+BA 0.5mg/L、White+BA 0.5mg/L、LS+BA 0.5mg/L为基本培养基,分别附加浓度为0.1mg/L的IBA、NAA和IAA的共18种培养基中,进行不定芽的分化培养和分化继代培养。重复4次,每次重复继代培养5代,每处理接种100个材料。培养45d观察统计。 　　1.3.4试管苗的生根培养。把上述分化培养的高0.7cm以上的不定芽从基部剪下,把下部切口在浓度为20mg/L的NAA溶液中处理5min后,接种到1/2 MS+IAA 0.1mg/L、1/3 MS+IAA 0.1mg/L、B5+IAA 0.1mg/L、White+IAA 0.1mg/L、LS+IAA 0.1mg/L等6种培养基上进行生根培养。每处理接种200个材料,重复4次。培养30d观察统计。 　　1.3.5试管苗的生根继代培养。把上述由不定芽培养的生根试管苗剪成长1cm左右、至少具有2个叶片的茎段,接种到MS+IAA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L、1/2 MS+IAA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L、1/3 MS+IAA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L、B5+IAA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L、White+IA