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草鱼T细胞表面分子CD4L和CD8αβ的cDNA克隆及其免疫学特性研究-生物化学与分子生物学专业论文
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独 创 性 声 明
本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得电子科技大学或其它教育机构 的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示谢意。
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签名: 导师签名:
日期: 年 月 日
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摘要
摘 要
在哺乳动物中,T淋巴细胞表面分子标记CD4和CD8将T细胞分为辅助性 T 细 胞和细胞毒性T细胞两种主要亚群。具体地,CD4和CD8分子分别通过与自身 M H C Ⅰ类分子和Ⅱ类分子的恒定区结合,加强T细胞与APC或靶细胞的相互作用以及 TCR-CD3信号的转导。为获悉它们在鱼类的分子结构和可能的功能信息,本课题 克隆了草鱼CD4L、CD8?和CD8?基因,得到了它们的全长cDNA序列。预测的蛋 白质拥有和哺乳动物以及其它鱼类相似的结构,例如都含有免疫球蛋白超家族成 员。通过半定量PCR我们检测到CD4L、CD8?和CD8?基因在草鱼胸腺中有最高表 达量,其次在鳃、头肾、肾和小肠等其它免疫相关组织中有高表达。为进一步明 确CD4L、CD8?和CD8?的免疫学功能,本课题以草鱼外周血淋巴细胞(PBLs)为 模型,发现PHA明显上调T细胞的表面分子标记CD4L、CD8?和CD8?的mRNA水 平的表达,然而LPS无此作用。这一结果验证了PHA和LPS分别特异作用于鱼类T 和B淋巴细胞的性质。
NF-?B 信号通路对于哺乳动物 T 细胞的功能至关重要,而且不同的 NF-?B 家 族成员在 T 细胞中发挥不同的作用,因此研究 NF-?B 信号通路十分必要。本课题 克隆了草鱼 NF-?B 信号通路中的抑制蛋白 I?B?,进一步在草鱼 PBLs 中,发现 LPS 从 3 h 开始刺激 I?B?的表达,12 h 后达到顶峰然后衰减,这和哺乳动物中的 I?B? 的自调控作用方式是一致的。而 PHA 从 1 h 开始呈现持续上调 I?B?的表达。结果 还显示 NF-?B 的抑制剂可以抑制 LPS 和 PHA 对 I?B?的上调作用;LPS 可以促进 I?B?的磷酸化,但 PHA 没有该作用。上述结果表明 LPS 和 PHA 通过 NF-?B 分别 调节 B 细胞和 T 细胞,但参与的 NF-?B 信号通路细节又有区别。
关键词:CD4L,CD8?,CD8?,I?B?,外周血淋巴细胞
I
ABSTRACT
ABSTRACT
In mammals, CD4 and CD8 distinguish the two major T-cell subsets into helper CD4-positive T-cells and cytotoxic CD8-positive T-cells, respectively. They interact with the constant region of the MHC molecules and activate TCR through the CD3 pathway. But very little is known about their functional role in fish. In this study, we obtained the complete cDNAs of grass carp CD4L, CD8??and CD8?. The predicted proteins for grass carp CD4L, CD8??and CD8??are similar to their counterparts of mammals and other fish, such as the Ig super-family domain. Semi-quantitative PCR revealed that the highest levels of CD4L, CD8??and CD8??mRNA were found in the thymus, while some expression was also seen in the gill, head kidney, kidney an
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