草菇碳水化合物活性酶编码基因在不同基质降解中的表达水平及新型糖苷水解酶GH61家族基因的分子生物学特性研究-食品科学与工程专业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 草菇碳水化合物活性酶编码基因在不同基质降解中的表达水 平及新型糖苷水解酶 GH61 家族基因的分子生物学特性研究 摘 要 草菇（Volvariella volvacea）是一种可以利用稻草、废棉等农业剩余资源进行 人工栽培的大型真菌，其营养价值高味道鲜美深受广大消费者的喜爱。早期以稻 草秸秆为主要原料栽培草菇，其生物学效率低仅为 10%~20%，后期改进栽培原料 及方式以废棉进行栽培，其生物学效率提高到 25%~40%。草菇生物学效率与其降 解栽培基质中木质纤维素类物质密切相关，对草菇中基质降解相关基因进行研究 可以为了解栽培基质的组成与基质降解相关基因的表达水平之间的关系提供依 据，为进一步定位基质降解的关键基因提供工作基础。 本研究选取草菇菌丝阶段，通过基因芯片技术，对生长在稻草秸秆基质和棉 纤维基质上草菇菌丝基因表达情况进行分析，重点比较了碳水化合物活性酶 （CAZyase）编码基因的表达水平，发现 GH61 家族基因表达活跃，并进一步对其 进行生物学特性研究。具体实验结果如下： 1. 对稻草和棉花培养基上草菇菌丝的基因表达情况进行分析，在筛选出差异 基因后，分别对其进行基因功能和代谢通路分析发现：（1）基因功能分析方面， 稻草基质上高表达基因主要集中在与木质纤维素降解相关基因功能、阳离子结合 以及钙、锰等多种离子的转运过程；代谢通路方面，基因主要集中在酚类、烯烃 类、芳烃化合物等多条异源物质代谢途径。（2）棉纤维基质上高表达基因主要集 中在氧化还原活性上，以及细胞分裂、DNA 复制等与生长增殖相关的过程。稻草 秸秆成分复杂，草菇表达大量异源物质降解相关基因，可能消耗较多能量，而棉 纤维基质上高表达的基因主要与生长等生物过程相关，草菇在棉纤维基质上表达 少量的基质降解基因便可以满足棉花基质上更快生长速度的能量需求。 2.对碳水化合物活性酶编码基因的表达情况进行分析，发现基因表达情况总体 呈现易被利用成分（淀粉等）的相关基因表达活跃，难分解成分（木质纤维素） 对应的基因表达水平较低；稻草基质上高表达基因较多，棉纤维基质上高表达基 因较少。其中 GH61 家族基因表达情况特殊，草菇基因组中共发现 30 个 GH61 家 i 族同源基因，在稻草基质上高表达的 57 个 CAZyase 编码基因中 GH61 基因占 11 个，棉纤维基质上高表达的 8 个 CAZyase 编码基因中占 4 个，剩下的 15 个 GH61 基因总体上在两种培养基上都处于相对高表达的状态，GH61 家族基因在基质利用 的过程中可能发挥着重要的功能。 3.对草菇中注释到的 30 个 GH61 家族基因进行生物信息学分析，发现这些基 因存在大量的串联重复现象，序列一致性分析发现 30 个基因之间的氨基酸序列一 致性低，但串联基因之间序列一致性高。系统发育树和内含子外显子结构显示串 联重复基因聚在系统发育树的同一进化枝上，并具有相似的基因结构。基本性质 预测方面，30 个 GH61 基因间差异较大，分子量、等电点差别明显，除含有 Glyco_hydro_61 功能域外还存在多种功能域。 4.对 14 个真菌物种共 174 个 GH61 家族基因分析发现，不同物种之间 GH61 基因数目差异很大，基因串联成簇现象在其他物种中也普遍存在，成簇基因具有 相近的进化位置。GH61 基因在草菇和双胞蘑菇基因组中有相近的进化关系，两个 物种的 GH61 基因在进化枝上彼此邻近。金属离子对其表达水平的影响分析，发 现有 27 个 GH61 基因检测到转录活性。总体上，锰离子对其有不同程度的诱导作 用，而铜离子的诱导作用不明显。 关键词：草菇，木质纤维素降解，GH61 家族基因，基因表达谱 ii Gene Expression of Carbohydrate Active Enzymes of Volvariella volvacea in Different Matrix Degradation and Molecular Characteristics of Glycoside Hydrolase GH61 Family Genes ABSTRACT Volvariella volvacea is an important fungi cultivated by substrates rich in lignocellulose, such as straw stalk and cotton waste. It is a favorite food because of its high nutritional value and good tastes. Biological efficienc