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旋覆花中化学成分及其活性的研究 　　[摘要] 综合运用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制备HPLC色谱分离方法分离纯化旋覆花中的化学成分，采用NMR和质谱等有机波谱学方法鉴定各单体化合物的结构，进一步测试各化合物的抗炎活性。从旋覆花乙酸乙酯提取物中分离得到15个化合物，鉴定为二氢芥子醇（1），（3S，5R，6S，7E）-5，6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmen-9-one（2），（6R，7E）-9-hydroxy-4，7-megastigmadien-3-one（3），阿里二醇（4），蒲公英醇乙酸酯（5），8，9，10-三羟基百里香酚（6），花旗松素（7），木犀草素（8），泽兰黄酮（9），泽兰黄醇素（10），菠叶素（11），槲皮素（12），对羟基桂皮酸（13），咖啡酸（14），咖啡酸乙酯（15）。化合物1，2，7，13，15为首次从该属植物中分离得到，化合物3， 4，9～11，14为首次从该种植物中分离得到。抗炎活性测定结果表明，化合物3，6～12，14具有明确的抑制c-Kit Ligand（KL） 诱导的肥大细胞白三烯C4 （LTC4） 生成和脱颗粒的作用，而且化合物8和12具有较强的抑制脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞一氧化氮（NO） 释放作用。首次报道了黄酮类化合物7，9～11对LTC4和肥大细胞脱颗粒具有较强的抑制作用。 　　[关键词] 旋覆花；化学成分；白三烯；肥大细胞脱颗粒；抗炎作用 　　[收稿日期] 2013-07-26 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目；天津市自然科学基金项目（13JCYBJC24800）；高等学校博士学科点基金项目（20121202120009） 　　[通信作者] *金美花， E-mail：jinmeihua@；*唐生安， E-mail：tangshengan@ 　　[作者简介] 朱虹， 硕士研究生， Tel E-mail：zhuhong890707@163.com 　　《中国药典》2010年版收录的旋覆花为菊科植物旋覆花属旋覆花Inula japonica Thunb.或欧亚旋覆花I. britannica L.的干燥头状花序，作为传统的中草药主要分布在欧洲、非洲及亚洲的中国、韩国和日本[1-2]，以地中海地区为主，在我国有20 余种。目前，国内外学者报道了旋覆花中富含甾醇、倍半萜及黄酮类化合物[3]，药理研究结果表明，旋覆花属植物在抗肿瘤[4-6]、抗炎、抗血脂[7]和护肝、及预防和治疗糖尿病[7]等方面都具有很好的生物活性。本文对河南产旋覆花I.japonica 开展了活性化学成分研究，从中分离得到15个化合物，利用有机波谱技术鉴定其化学结构，分别为二氢芥子醇（1），（3S，5R，6S，7E）-5，6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmen-9-one（2），（6R，7E）-9-hydroxy-4，7-megastigmadien-3-one（3），阿里二醇（4），蒲公英醇乙酸酯（5），8，9，10-三羟基百里香酚（6），花旗松素（7），木犀草素（8），泽兰黄酮（9），泽兰黄醇素（10），菠叶素（11），槲皮素（12），对羟基桂皮酸（13），咖啡酸（14），咖啡酸乙酯（15）。进一步考察了以上化学成分对肥大细胞LTC4生成、脱颗粒及巨噬细胞NO释放的影响。 　　1 材料 　　Bruker AV 400核磁共振仪（TMS内标）；液质联用色谱仪：Alliance 2695 Quattro Micro TM ESI（Waters）；半制备高效液相色谱仪：日本分光公司（JASCO）， PU-2089（泵），RI-2031及UV-2075（检测器）；制备HPLC色谱柱：GPC（凝胶渗透色谱柱） Shodex， Asahipak GS-20G（20 mm×500 mm），YMC-Pack ODS-A SH-343-5（20 mm×250 mm）， YMC-Pack S IL-06（ 20 mm×250 mm， 5 μm）；凝胶柱色谱Toyopearl HW-40C（Tosoh）；日本Hitachi UV-3310型紫外-可见分光光度计；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产，所用试剂均为分析纯；氘代试剂购自美国Sigma-Aldrich公司。 　　小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞（韩国细胞株银行）；LTC4 ELISA试剂盒（美国Cayman Chemical公司）； KL（加拿大STEMCELL Technologies公司）；LPS（美国Sigma-Aldrich公司）；RPMI-1640，DMEM和胎牛血清（FBS）（美国Hyclone公司）。 　　旋覆