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染色体分带技术及其的应用 　　【摘 要】染色体分带是60年代后期发展起来的一项细胞学技术，借助于某些物理、化学处理使中期染色体显现出深浅不同的带纹，各物种的每一条染色体其带型纹的数目、位置、宽度及深浅度都有相对的恒定性，因此染色体分带是染色体识别的重要依据。这一技术自发展起来便广泛应用，已成为鉴别基因组中的各个染色体或较大的染色体片段、追踪外源染色体的有效手段。 　　【关键词】染色体分带；遗传学；应用 　　引 言 　　染色体分带技术是一种用染料对染色体进行分化染色的方法。用一般细胞学染色法，染色体着色是均匀的，但若经过某些物理化学等条件如： 温度、酸碱等处理后再以染料染色，或单经某些荧光染料染色就可以染出深浅不同的带纹的纵向结构。由于这些带纹和结构是染色体固有结构的反映， 因而各不同物种之间、同一物种各（染色体之间同一染色体处在细胞不同分裂时相） 之间所出现的带纹也就不同。这不仅使我们鉴别染色体组中各个染色体及其大的片段提供了极大的方便， 使追踪某一特定染色体在遗传或杂交中的去向成为可能， 同时也为进一步认识染色体本身的结构和功能提供了一种有利的分析手段。因而有人认为分带技术为核型研究带来了一次革命。 　　1、染色体分带简述 　　1.1 染色体分带的带纹种类 　　1.1.1 Q带。瑞典细胞化学家T.Caspersson等用荧光染料芥子喹吖因作染色剂处理，染色体制片在荧光显微镜下观察，染色体呈现明暗相间的清晰带纹。不久，C.G.Vosa发现用与芥子喹吖因类似的喹吖因处理也能使植物染色体显带.由这两种染料处理产生的带称为Q带。 　　1.1.2 G带。G带是动物细胞遗传学研究中常用的技术。它是用碱盐溶液对染色体制片进行预处理，有时也用胰蛋白酶或链霉蛋白酶进行处理，然后用Giemsa染料染色。一般认为G带显示的是常染色质构成的染色粒，它所反映的很可能是蛋白质尤其是组蛋白在染色体上的不均一分布。 　　1.1.3 C带。C带是用酸、碱对染色体标本进行变性处理，然后置于溶液中，在600C下保温30～120min不等，再以Giemsa染料染色。由于起初在哺乳动物中发现带纹位于着丝粒区域，故称之为着丝粒带，简称C带。C带技术对辨认Y染色体是非常有用的。 　　1.1.4 N带。N带Matsui等为显示NOR建立的方法。N带是用三氯醋酸和盐酸先后处理，Giemsa染料染色后获得。N带技术方法简便，结果稳定，在植物染色体研究中得到较广泛的应用。 　　1.2 染色体分带技术的命名 　　由于染色体分带技术是分化染色技术，所以常按所使用的染料或染出的结构来命名。近五年来随着分带技术应用的逐渐普及和采用的染料逐渐增多，分带名称也日益增多。有些工作者曾试图以染色体的固有结构把分带技术划分为儿大类，但由于分带机理目前尚未有定论，这种分类方法也未趋统一。这里仍按习惯以所使用的染料归类，如下： 　　1.2.1 荧光染料。以荧光染料处理染色体后，在荧光显微镜下，可见深浅不同的带纹， 按染料常见的有以下几种： 　　Q带 H带 AO带 　　此外，还有以DAPI染色的DAPI带，也是显示对应于不同异染色质部分。荧光染料分带的优点是材料处理比较简单，重复性好。虽易退色但可重染。缺点是所制标本不能保存，需要荧光显微镜等特殊设备。 　　1.2.2 Giemsa染料。常规制成的染色体标本， 经温度或不问浓度的酸、碱、盐、尿素、酶等试剂处理后，再以 Giemsa染液染色， 便可使染色体呈现不同的带纹， 主要有： 　　C带 F-B SG法 G带 R带（Reversebandiog ） N 带 C d 带 　　1.2.3 其它染料 　　银染： 一般用氨银法处理染色体， 可以使有转录活性的核仁组织者区域（NOR）着色，此法应用颇广。 　　Hy带：染色体经热的盐酸处理后，以醋酸洋红染色，在植物中可以相当快地产生一种特殊的Hy+和Hy―带纹。可能是染色体蛋白被分化性的抽提。 　　O带：染色体标本温育在含有地衣红的SSC溶液中能获得与G带相似的O带。 　　F带：经孚尔根染色法产生的带纹称F带。人的Y染色体长臂远端一半区域Q和G带为负反应，F带则为正反应。 　　1.2.4 免疫化学染色法。各种核苷或核苷酸与载体蛋白的结合物免疫家兔后获得相对应的抗体。一种是直接标记荧光于抗体上， 与变性的染色体D NA染色后即可在荧光镜下观察。另一种是采用简接荧光法和间接免疫酶标法，即以上述对应抗体作为第一抗体与变性染色体的D N A 作用后， 再以荧光标记或过氧化物酶标记的羊抗免，γ球蛋白为第二抗体染色后， 前者即在荧光镜下呈现出各种核苷或核苷酸抗体的Q 带、R 带、C 带， 后者需再经D A B 在H2O2 存在下显示棕色分带着色。不同核苷酸抗体需要不同的染色体D