凡纳滨对虾与WSSV侵染相关的细胞与基因功能分析-水产养殖专业论文.docxVIP

对 VP28 和 VP31 进入血细胞没有起到抑制作用。VP28 和 VP37 的多克隆抗体对 VP28，VP37 进入细胞有明显抑制作用，而对 VP31 抗体对 VP31 进入细胞没有抑 制作用。说明血细胞对囊膜蛋白 VP31 的内吞存在非特异性。通过实验结果，我 们可以推论，BP53 作为 VP37 的受体在病毒侵染细胞过程中发挥重要作用，而 Rab7 可能作为一种细胞因子，与 VP28 相互结合参与信号转导并调节感染过程。 3、凡纳滨对虾 Runt 转录因子 cDNA 全长序列克隆：应用反转录和 cDNA 末端快速 扩增（RACE）技术，首次在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中克隆并测序了 一种 Runt（lvrunt）基因全长。lvrunt cDNA 全长 1754bp，含有 1 个 663bp 长 的开放阅读框，编码 221 个氨基酸，理论分子量为 23.6 kDa，具有 Runt-family 结构域。对该基因的蛋白序列分析显示，Lvrunt 的氨基酸序列与软尾太平喇蛄 （Pacifastacus leniusculus）相似度为 88.1%，与其它种类的氨基酸序列相似 性在 30%—52.4%范围内，该蛋白表现较高的种间保守性。 4、lvrunt 在凡纳滨对虾的组织表达特异性分析及注射对虾造血激素（LvAST） 和 WSSV 对其转录表达的影响：对凡纳滨对虾鳃、肠、肝胰腺、类淋巴、心脏、 肌肉组织和血淋巴 lvrunt 的转录特征进行分析，结果显示该基因几乎特异性地 在血淋巴细胞中表达，而在其它组织中表达较低。肌肉注射重组蛋白 rLvAST6h 后，或白斑综合征病毒(WSSV)粗提液 12h 后均观察到 lvrunt 转录表达水平显著 提高。 5、凡纳滨对虾 Runt 的原核表达及其对 WSSV 感染的体外中和实验：构建重组表 达载体 pBAD/gIIIA-lvrunt，转化到大肠杆菌 E.coli 内，加入 0.02%L-阿拉伯糖于 37℃诱导表达，通过 SDS和对表达序列标签（6×His）的检测，鉴定得到 重组目的蛋白，并经 Co2+亲和层析纯化得到重组 LvRunt 蛋白。注射复性的重组 蛋白于凡纳滨对虾或投喂给凡纳滨对虾小虾苗，再用 WSSV 攻毒，通过累计死亡 率的计算，LvRunt 并未对对虾起到保护作用。 关键词：凡纳滨对虾 Runt 转录因子 WSSV 囊膜蛋白 组织细胞 内吞作用 Functional analysis of the cells and the gene related with WSSV infection in Litopenaeus vannamei Abstract White spot syndrome virus (WSSV) is a major viral pathogen of shrimp, which caused severe damage in shrimp culture all around the world since early 1990s. WSSV is an enveloped virus. The first step of infecting the host cells is that envelope proteins binding to the host cell membrane and then they were internalized by cells to initiate the infection process. Until now, several structural proteins were reported to take part in infecting cells. While the molecular mechanism of viral infection is unclear and there were no effective means of prevention and control. To analyze the molecule mechanism of WSSV infection, our paper focus on some WSSV envelope proteins and the transcription factor Runt which were related with hemopoiesis of shrimp. In the test, we used fluorescence microscope to observe whether the WSSV envelope proteins could induce th