（毕业论文设计）-CecropinA-thanatin杂合肽对小鼠生长性能及免疫功能的影响（学术精品）.doc

宁夏医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 PAGE III 分类号：R4 单位代码：10752 密 级：公 开 学 号：2010148 宁夏医科大学 硕士研究生学位论文 Necrophilia-thanatin杂合肽对小鼠生长性能及免疫功能的影响 The hybrid peptide CecropinA-thanatin impact on the mice growth performance and immune function 学 位 申 请 人： 指导教师： 副教授 申请学位门类级别： 医学 专业名称： 临床检验诊断学 研究方向： 病原微生物与免疫 所在学院： 检验学院 论 文 完成 日 期： 二0一三年四月 宁夏医科大学研究生学院 Ningxia Medical University Thesis for Application of Master’s Degree Manufacture of Combinant Antibacterial Peptides from Gene Engineering and its Antibacterial Activity Analysis Student’s Name: Sun Huimin Supervisor： Wang Xiuqin Associate Professor Subject Category: Medicine Major: Clinical Laboratory Diagnostics Specialty: Microbiology School: Clinical Laboratory College Completion Date: Apr. 2013 CecropinA-thanatin杂合肽对小鼠生长性能及免疫功能的影响 摘 要 目的 本研究测定了本课题组前期人工设计、合成、表达的CecropinA-thanatin杂合肽对临床分离的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌的体外抑菌活性，其在体外具有抑菌活性，但该杂合肽在体内对机体的影响如何还有待于进一步研究。本课题组通过动物实验，对该杂合肽不同剂量、不同给药途径对小鼠生长性能及免疫功能的影响进行研究和探讨，为基因工程抗菌肽的临床应用奠定了基础。 方法 1以本课题组人工设计合成的CecropinA-thanatin杂合肽为研究对象，进行大规模的的蛋白表达以及对表达上清的分离，对不同批次的表达产物进行混合后测定混合液的MIC，并对临床分离的革兰氏阳性菌（金葡菌）和革兰氏阳性菌阴性菌（大肠杆菌）进行体外抑菌活性的测定； 2根据实验目的选择周龄、品系合适的实验小鼠，进行分组、称重；处理因素分别为高、中、低剂量灌胃抗菌肽，中间剂量腹腔注射抗菌肽，中间剂量灌胃庆大霉素，空白对照组灌胃pPICZαA空载体转化酵母的上清，各处理方法连续处理4周；4周后脱臼处死小鼠，称量体重、脾脏、胸腺的质量； 5检测相关指标之前腹腔注射2%SRBC免疫小鼠，脱臼处死小鼠后新鲜取脾进行脾淋巴增值试验、抗体细胞生成试验； 6检测小鼠巨噬细胞的吞噬功能时，提前一小时注射5%鸡红细胞，脱臼处死小鼠后吸取腹腔渗出液涂片镜检，油镜下计算巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数； 7摘眼球取血后收集血清，分离后进行ELISA试验检测血清中的TNF-α含量；收集小鼠的肠组织标本，液氮速冻后放入-80℃冰箱保存，进行荧光定量PCR试验检测空肠组织中的TNF-α含量。 结果 1对CecropinA-thanatin杂合肽进行了扩大表达，并且对大批量表达产物进行了分离，混合了不同表达批次的杂合肽，经测定杂合肽混合液的MIC为0.45×10-3 mol/L，对临床分离的革兰氏阳性菌（金葡菌）、革兰氏阴性菌（大肠杆菌）的体外抑菌活性测定，抑菌圈分别为45㎜和33㎜； 2通过对各组小鼠的生长性能进行观察、测定，发现在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的活动状态、反