猪瘟诊断的方法的研究进展探析.docVIP

猪瘟诊断的方法的研究进展探析 　　摘要 概述了猪瘟诊断方法的研究进展，包括血清学诊断方法和病原学诊断方法，为猪瘟诊断方法的实际应用提供了技术帮助。 　　关键词 猪瘟；诊断方法；血清学；病原学 　　中图分类号 S858.285.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2009）05-0215-01 　　 　　猪瘟（Classical Swine Fever，CSF）是由猪瘟病毒引起的一种高度传染性的疫病，农业部将其列为一类传染病。猪瘟临床可分为急性型、亚急性型、慢性型、非典型型猪瘟，以出血性败血症变化为特征。猪是猪瘟病毒的唯一易感动物，本病流行广，传染快，死亡率高，一年四季均可发生。本病自 1833 年在美国俄亥俄州发现以来，流行世界各地，给养猪业造成了不同程度的经济损失。要控制猪瘟的流行和发生，必须强化猪瘟诊断方法的研究，数十年来，各国学者的倾力研究，促进了猪瘟诊断方法的的日趋完善和突破，为猪瘟的控制和消灭提供了良好的技术工具。 　　 　　1 血清学诊断方法 　　 　　猪瘟ELISA试验是世界动物卫生组织推荐的血清抗体检测方法。Clavijo等利用CSFV E2基因表达产物制成单克隆抗体，建立了竞争ELISA方法，利用此方法对临床健康猪和试验感染猪血清2 000份进行检测。结果表明其特异性和敏感性分别达到100%和86%，并能在人工感染后21d检测到抗体。周宗元等[1]应用猪瘟兔化弱毒抗原与HRP-SPA建立了HRP-SPA-ELISA方法检测CSFV抗体。周广森等[2]应用HRP-SPA-ELISA对某猪场40份母猪血清和240份仔猪血清进行检测，发现母猪中有10%隐性猪瘟感染者，仔猪中有3.7%的隐性猪瘟感染者，证明了隐性猪瘟的母猪是垂直传播和水平传播的传染源。Shannon等[3]报道抗原捕获ELISA能够检测2种不同株CSFV感染的病猪血液和组织中的抗体。余兴龙等[4]以在大肠杆菌中高效表达的CSFV E2基因主要抗原编码区（mE2）基因产物为抗原，以HRP标记的兔抗猪IgG为二抗，建立了检测CSFV抗体的间接ELISA方法，试验证实用重组mE2蛋白作为诊断猪瘟的抗原，具有特异性高、易纯化和成本低等优点。Saunder、邱惠深、房德兴等分别建立了快速酶标微量技术、淋巴细胞杂交瘤技术和单克隆抗体ELISA抑制法等免疫酶测定技术，这些测定技术均以猪瘟单克隆抗体为基础[5-7]。 　　兰州所李树春等[8]进行了猪瘟间接血凝试验的研究。将猪瘟兔化弱毒株细胞培养物纯化后，用醛化绵羊红细胞致敏，制成间接血凝诊断液，用以检测血清中的猪瘟抗体效价。该方法具有操作简单、无需特殊仪器、快速和适于大量样品的检测等优点，非常适合基层单位的推广应用。 　　胶体金免疫层析技术是近几年国内外兴起的一种快速诊断技术，目前分为2类。一类是与仪器配套的自动化免疫分析，另一类是以硝酸纤维素膜为载体的快速免疫分析。金颜辉等[9]应用该技术进行了检测猪瘟抗体的研究，共测试了30份标准阳性血清和18份标准阴性血清，符合率100%，用该方法进行现场检测具有直观、准确、便捷等优点。 　　 　　2 病原学诊断方法 　　 　　荧光抗体试验是Robertso[10]于1965年首次报道的。主要应用于猪瘟病料和组织（Flurorescent Antibody，FA）培养物的检测。主要是用扁桃体、脾、肾、回肠末端等器官制作冰冻组织切片，或将病料乳剂接种于敏感细胞，培养后也可用FA检测猪瘟抗原。高免血清的制备是试验的关键，一般是将猪只免疫6次后提取血液，提纯免疫球蛋白，进行荧光素标记。目前已有多家商品化的产品可供选择。FA方法简便、快捷、可靠，所以许多国家将其作为执行猪瘟扑灭计划的法定诊断试验。 　　反转录聚合酶链反应（RT-PCR）是以病毒RNA为模板进行反转录后，再以PCR进行核酸扩增来检测CSFV的方法。罗廷荣等[11]应用RT-PCR对来自广西不同地区的135份疑似猪瘟病料进行检测，阳性率为6.2%。另从柳州地区采集的健康猪扁桃体和淋巴结276份，检测阳性率为13.4%。其中扁桃体检出阳性率高于淋巴结检出阳性率，证实了RT-PCR技术的临床诊断方法可行性。刘海鹏等[12]建立了口蹄疫病毒与CSFV的二联RT-PCR诊断方法，对2种病毒的敏感性可达到10-4倍稀释，约10pg的总RNA。证明了该方法对这2种病毒诊断的高度敏感、特异等特点。Liu等报道了用RT-PCR方法检测感染组织中的CSFV，其敏感性达到10-4TCID50。令人感兴趣的是当用巢式RT-PCR进行检测时，敏感性可提高1 000倍，这对疫病的及时诊断将有更大帮助。Choi等利用巢式RT-PCR对人工接种CSFV的5头公猪精液进行了检测，结果在接种后7d便检测出了