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纳尺度的空间微流体免疫检测的方法介绍 　　摘要：基于二十一世纪的芯片实验室技术，在商品质量安全保障科技研究中，纳尺度空间微流体免疫检测方法是最有前景的现代分析测试手段之一，具有显著的方法优点和诸多技术关键，以及鲜明的创新特质。 　　关键词：纳尺度空间，微流体，免疫检测。 　　一、前言 　　商品质量安全检验检测是商品质量安全保障至为核心的科技工作，其手段的优劣将直接影响商品质量安全保障工作的质量和效率。目前，商品质量安全科技工作的对象常为超大数目和种类的产品，常规的免疫学测试手段，因其适用性的不足和检测效率的瓶颈，已远不能满足我国商品质量安全符合性检验对高端科技支撑的迫切需求。基于芯片实验室技术【1】，纳尺度空间微免疫检测法[2][3]将经典的免疫测试技术微型化并局域于纳升尺度空间内进行，具有高效传质和快速侦测以及现场便携能力，故代表了传统免疫学测试方法的革命性进步。基于“十一五”相关科研成果，在“十二五”期间全面了解纳尺度空间微免疫检测技术相关知识并积极进行相关对象的检测技术研究，将不仅有助于全面提升我国商品质量安全科技水平，有效应对发达国家/地区相关技术性贸易措施，还将有助于大幅促进科学知识体系创新，整体带动国家应用科技进步，全面解决我国商品质量安全科技领域所广泛面临的众多实际问题，因此，纳尺度空间微免疫检测技术法应用前景优良，研究意义重大。 　　二、方法优点 　　常规的免疫测试方法，一般是通过核素标记等或酶标记等标记法实现的，而且，一些重要的生物资源如抗原或抗体等的包被以及固相基质的洗涤等过程都需要在实验室内进行，因此，不仅需要昂贵的仪器，而且操作步骤繁多，测试成本较高，导致分析误差较大，难以满足现场快速检测的需要。 　　纳尺度空间微免疫测试集合了二维微流体技术和高灵敏的免疫反应测试的优点，因此，较之一维微流体技术，可为抗原-抗体特异性的生物识别反应提供更加缩短了的扩散距离和更为短暂的扩散时间，因此，所需特异性检测的完成就更为迅捷。 　　另外，由于检测是使用了基于分析质在可见光波段的激光辐照下热效应的不同，因此，这种非标记的检测技术从根本上避免了标记检测法的一些劣势，如外源性标记物的引入对反应和检测系统的干扰，以及检测所需的标记物对检测人员身心健康的一些不安全性的因素等。 　　再者，纳尺度空间微免疫分析法是将几乎所有的常规操作进行了自动化处理，包括抗体包被、微球导入和固相载体的洗涤等诸多步骤，所以，纳尺度空间微免疫分析法很好地消除了所可能的人为操作误差，不仅节约了分析时间，也大幅提高了测试结果的可靠性。 　　最后，纳尺度空间微免疫分析法的开发都是基于微小部件，包括玻璃微芯片、小型半导体激光器、微型注射泵和光纤检测组件等，因此，纳尺度空间微免疫分析仪的质量和体积都先天具有优良的便携性能，尤为适合到现场进行相关对象的分析测试，并及时开展对相关商品质量安全不良事件的高效应对。 　　一般说来，适用于现场便携的快速分析方法根据分析原理和分析对象的不同而相应有不同的实际性能要求，以检测人体免疫球蛋白E生物标志物为例，使用纳尺度空间微免疫分析法可以在半小时内完成，所需试样的体积仅需10微升，分析灵敏度可达到5纳克/毫升，方法的变异系数在10%以内，而经典的分析方法，虽分析灵敏度相当，但其分析时间往往需要数小时，样品至少需要数百微升，变异系数在20%以内，所以，纳尺度空间微免疫分析法的分析效能较经典方法至少提高了10倍，而测试可靠性更为良好，所以能够完全满足实际分析测试方法的需要。 　　三、技术关键 　　纳尺度空间微免疫分析法是基于微纳技术领域一系列高精尖手段的集成，因此，在很多环节都相应存在较多的技术关键，其中最为主要的分别如下： 　　（1）纳尺度空间的实现 　　纳尺度空间的实现是建立纳尺度空间微免疫分析法的首要技术。常规的一维微流体器件材料，如PDMS，PMMA等，因为先天存在材料刚性和粗糙度方面的缺点，所以很难实现二维微流体器件的制作，故无法实现纳尺度空间，而玻璃芯片，因其出众的加工性能和纳米级别的表面粗糙度，故成为纳尺度空间实现的不二之选，玻璃芯片加工过程中的光刻和微流道制作以及键合等，是纳尺度空间实现的技术关键点。 　　（2）抗体的固定化和交联 　　抗体的固定化和交联是成功实现分子识别和免疫检测的重要前提，理论上通过物理、化学和生物手段都可实现抗体的固定化和交联，但是，考虑到具体的检测对象和检测体系的特点，一般应对上述抗体固定化及交联的手段进行优化选择，并完成相关的表征和确定。 　　（3）反应液的驱动和混合 　　免疫检测反应不免涉及多种反应液，在微流道内反应液的有效驱动和混合也是成功实现良好的重复性检测的必要条件，因此，微流道的设计制作以及驱动方式的选择还有驱动时间的控制都是研究的关键点。