麻疹病毒检测的方法的研究进展.docVIP

麻疹病毒检测的方法的研究进展 　　【中图分类号】R511.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)06－0465－01 　　【摘要】麻疹病毒（MV）是一种导致全球性传染病、给人类健康带来极大危害的病原体。ＭＶ的实验室检测对麻疹的监测、预防、判断预后及采取恰当的处理措施，均具有非常重要的流行病学意义和临床应用价值。而麻疹病毒实验室检测技术的发展对检测方法的改进和完善同样具有重要意义。 　　【关键词】 麻疹病毒；检测；进展 　　麻疹是由麻疹病毒引起的急性出疹性呼吸道传染病，是已知的对人类传染性最强的疾病之一。世界卫生组织（WTO）已将麻疹作为消灭脊灰之后又一个通过免疫手段消除的传染病［1］。因此，采用快速、特异、敏感的实验室检测方法，对于及时发现和确诊麻疹病人，迅速控制疫情、降低麻疹发病率具有重要意义，也是实现消除麻疹目标的重要技术保障［2］。 　　1 方法 　　1.1 病毒分离 　　虽然目前麻疹病毒的实验室检测方法种类很多，但病毒分离仍是不可替代的经典方法，多用于病毒的分子流行病学研究。 　　1.1.1 最初B95a细胞（含EB病毒的绒毛猴B淋巴细胞）是用于麻疹病毒分离的首选细胞系。但是细胞中含有EB病毒对操作者可能造成危害，因此B95a已不再是麻疹病毒分离的首选细胞。 　　1.1.2 Vero/SLAM细胞是目前WHO推荐麻疹网络实验室使用的细胞，Vero/SLAM细胞分离麻疹病毒与B95a细胞具有同样的敏感性［3］。该细胞的优点是不含有感染性病毒，对实验室人员而言具有安全性。 　　病毒分离法因培养周期长、实验操作复杂、受时间限制、生物影响因素多等原因，已逐渐被一些快速、准确 、简便的检测方法所代替。尽管如此，病毒分离法仍是病毒检测的经典方法。因病毒变异快，病毒分离法可以分离出最新流行的病毒变异株，对鉴定新发传染病意义重大，还可为疫苗研发分离毒株。 　　1.2 经典血清学方法 　　用于MV检测的血清学方法有很多，早期有血凝抑制（HI）试验、中和抗体试验（NT）、补体结合试验（CF）等，可同时用于病毒和病毒抗体的检测、分离病毒的鉴定等，特别是HI和NT目前仍是MV鉴定和诊断的重要的方法，在检测和分离鉴定中起重要作用。 　　1.3 免疫学检测 　　由于酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光试验（IFA）、固相放射免疫试验（SPRIA）等方法将免疫学技术与酶、荧光等各种标记技术结合起来，极大地提高了这些方法的敏感性和特异性，同时又具有操作相对简单等优点，被广泛应用于临床。目前ELISA法是检测麻疹抗体最常用的检测方法。WHO麻疹和风疹网络实验室推荐采用ELISA方法检测急性期麻疹病毒特异性IgM抗体［3］，对麻疹疑似病例进行早期血清学诊断。 　　1.3.1 酶联免疫吸附试验（ELISA） 　　ELISA是目前应用最广泛的病毒抗原抗体检测技术，具有敏感、快速、操作简单的特点。临床上常用捕获ELISA法和间接ELISA法检测麻疹病毒抗体。 　　① 捕获ELISA法 　　利用包被在固相载体上的抗人IgM（μ链）抗体，捕捉血清中IgM，再用麻疹病毒抗体和已知的酶标记麻疹病毒抗体去检测血清中IgM抗体，利用底物使酶显色［4］。据孙花荣报告［5］麻疹病毒IgM在发病早期具有高度的敏感性和特异性，该法在发病1-3天阳性率为73.33%，4-21天阳性率为93.87%,故对早期诊断麻疹有着重要意义。 　　②间接ELISA法 　　将麻疹抗原包被于固相载体上，加入待测血清，再用酶标记抗抗体间接检测出特异性抗体［4］。一般应用间接ELISA法测定血清中IgG抗体，用于流行病学调查，如人群抗体水平测定和疫苗免疫效果观察等。邵荣标等［6］报告IgM抗体检测对麻疹病例诊断漏诊率相当高，病毒分离培养法漏诊率更高，可靠的方法是检测双份血清中的IgG抗体。 　　1.3.2 免疫荧光实验（IFA） 　　免疫荧光检测法是以荧光素标记在特异的抗体(或抗原)上，当抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下观察到其是否存在。分为直接法和间接法。 IFA具有简便快速、特异性高、敏感、能定量等特点，是麻疹网络实验室进行MV检测的重要方法之一。狄军波［7］比较IFA检测咽拭子麻疹病毒抗原和血清ELISA法检测麻疹IgM抗体对儿童麻疹病毒感染的诊断价值。典型麻疹组IFA、ELISA阳性检出率分别为96% 、58%；不典型麻疹组为100% 、59%；IFA的敏感度为97%，特异度为100%。IFA的敏感度要明显优于ELISA。但IFA因参与因素较多, 易出现非特异性荧光染色,并且需要使用荧光显微镜, 不易推广。 　　1.3.3 放射免疫试验( RIA) 　　放射免疫是以放射性同位素作为标记物的标记免疫测定法，放射免疫试验灵敏度极高, 能测出每毫升含ng和 Pg的