广西白裤瑶线粒体DNAHVRⅠ区多态性剖析吴群英.docVIP

广西白裤瑶线粒体DNAHVRⅠ区多态性剖析吴群英 　　【摘 要】目的： 通过对白裤瑶族线粒体DNA D-Loop HVRⅠ区序列碱基的测定，了解其遗传多态性。方法： 应用PCR 扩增产物及直接测序法， 对31名白裤瑶无血缘关系健康个体mtDNA HVRⅠ区进序列检测及分析。结果： 与Anderson 相应序列比对，白裤瑶群体mtDNA HVRⅠ区发现了88处突变，界定了3种单倍型，基因差异度分别为1.00， 偶合概率为0.25。结论： 广西白裤瑶线粒体DNA HVRⅠ区多态性有一定的本民族特点。 　　【关键词】白裤瑶；线粒体DNA；多态性 　　【Abstract】Objective： to study the genetic polymorphism of mitochondrial DNA in Baiku Yao nationality.Methods：The HVRⅠregion of mtDNA in 31 Baiku Yao from Guangxi were detected by PCR and examined by DNA sequencing. Results： Compared to Cambridge reference sequence， 88 polymorphic sites of HVRⅠwere found in Baiku yao mtDNA sequence， 4 haplotypes were defined.The genetic diversity was calculated as 1.00， and the genetic identity was 0.25. Conclusion： The national characteristics of Baiku yao show unique features compared with those of others. 　　【Key words】Baiku Yao； Mitochondrial DNA； Polymorphism 　　白裤瑶是瑶族中民族特色保留较为完整的支系之一，自称“努格劳”，因其男子穿及膝的白裤而得名“白裤瑶”，主要集居在广西南丹县和贵州荔波县相接壤的里湖瑶族乡、八圩瑶族乡和瑶山瑶族乡等地[1]。人类线粒体DNA（mitochondrial DNA， mtDNA）是一个由16569个碱基组成的闭合环状双链分子，由于母系遗传的特性，缺乏重组、进化速率高、群体内变异大等特点，而被广泛地应用于人类群体的起源、演化和亲缘关系以及疾病的遗传的研究。本文采用聚合酶链反应（PCR）技术及DNA测序法对广西南丹白裤瑶族mtDNA D-Loop HVRⅠ区进行了研究， 为少数民族群体遗传学研究提供新的数据。 　　1 材料与方法 　　1.1 样本来源 　　31名体检健康的白裤瑶样本均采自广西河池市南丹县，彼此间无亲缘关系，3代均为白裤瑶族，所有研究对象均知情同意。 　　1.2 mtDNA的提取 　　用消毒棉签刮取口腔黏膜细胞，浸泡于生理盐水中，将采集口腔黏膜细胞的棉签用生理盐水把口腔细胞清洗出来于1.5mlEP管中，进行13000 rpm，离心15min，小心弃去上清，然后加入200ul 10%chelex100树脂，56℃水浴30min，取出后振荡5-10s，100℃水浴10min，离心3min，4℃保存，上清用于PCR扩增。 　　1.3 HVRⅠ区的PCR扩增 　　PCR反应总体积为50ul，引物各1 umol/L， 上游引物：5’-TTAACTCCACCA-TTACCACC-3’，下游引物：5’- GAGGATGGTGGTCAAGGGAC -3’（由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，扩增片段长度为440bp），2×Taq PCR Master Mix 25ul， DNA模板5ul，去离子水补足50 ul。反应条件：94℃预变性1min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环后72℃延伸10min。 　　1.4 PCR产物的检测及测序 　　每个样品均取 10μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色观察扩增结果； 40ulPCR产物委托上海立菲生物技术有限公司进行测序。 　　1.5 统计学分析 　　测序结果与剑桥标准Anderson 序列比较，统计变异位点及变异类型。按照公式P=∑x2（ x 为每个个体单倍型频率）计算偶合概率，按公式h =（1-∑x2） n / （ n - 1）（ n为样本含量）计算基因变异度。 　　2 结果 　　2.1 HVRⅠ区的PCR扩增 　　用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物大小及纯度，结果表明，31例白裤瑶样本均成功扩增，