Beagle犬口服雷公藤片血浆中雷公藤红素LMSMS测定及药动学研究お.docVIP

Beagle犬口服雷公藤片血浆中雷公藤红素LCMSMS测定及药动学研宄朽 [ ]建立Beagle犬血浆中雷公藤红素的 LCMS/MS检测方法，用于Beagle犬口服雷公藤片的 药代动力学研宄。血浆样品经二氯甲烷提取，色谱条 件为 Phenomenex Luna C8 色谱柱(20 mmX 50 mm, 3 um)，流动相为甲醇乙腈异丙醇溶液(1:1) 01%甲 酸1.5 : 5.5 : 30;多反应监测(MRM)雷公藤红素 ([M+H]+，m/z4.5.1.3/201.1)和内标泼尼松龙 ([M+H]+，m/z 3.61.1/1.4.71)； DAS 10 软件对雷公 藤红素药时曲线进行拟合，并计算药代动力学参数。 在0680 0?1.3.60 ug?L-l,雷公藤红素与内标的峰面 积比值与浓度的线性关系良好，定量限为0680 0 u g?L-1,日内日间精密度小于61.5%，提取回收率为 504.2%?5.1.65%。Beagle 犬口服雷公藤片(1 片/kg), 血浆中雷公藤红素经时变化符合一室模型(w=l/cc)， 主要药动学参数分别为Cmax (3.5.64±95.40) u g?L-l，Tmax (2.62±069) h，Tl/2 (2.93±02.9) h, CL (0308±005.6) L?kg-l?h-l, AUC01.2 (1.3.1.1.6 ±3.1.94) ug?L?h-l, AUCO^ (1.4.2.83土3.75.7) u g?L?h-l。建立的LCMS/MS分析方法准确灵敏，适 于雷公藤片中雷公藤红素药代动力学研究。 ［关键词］雷公藤红素；雷公藤片；高效液相色 谱质谱联用；药代动力学 雷公藤红素主要来源于中药雷公藤的根皮，文献 报道［12］，雷公藤红素具有显著的生物活性，如抗炎、 免疫抑制及抗肿瘤等，是临床治疗类风湿病雷公藤片、 雷公藤多苷片等制剂的主要有效成分之一。作为雷公 藤属植物里面第一个被分离得到的化合物和雷公藤的 主要活性成分，对雷公藤红素的提取纯化工艺、药理 活性研究和制剂中含量分析均已有文献报道［3］，但雷 公藤制剂中雷公藤红素的体内过程鲜有报道。因此作 为雷公藤制剂中主要活性成分和毒性成分，有必要对 其进行体内药代动力学研宄。本实验通过建立Beagle 犬血浆中雷公藤红素的LCMS/MS检测方法，以雷公 藤片为受试制剂，对Beagle犬单剂量口服雷公藤片(1 片/kg)中的雷公藤红素进行药动学研宄，计算药动学 参数，为临床药动学研宄提供参考依据。 1材料 API4000 LCMS/MS联用仪，色谱工作站(Analyst 1.4.2)；梅特勒托利多AE2.40电子天平；Biofuge PrimoR冷冻高速离心机；DrictQ5超纯水机； Organomation 氯吹仪。 雷公藤片，三九黄石制药厂生产，每片含雷公藤 红素3.5.6 ug，批号100204.1Z;雷公藤红素对照品 （南京泽朗医药科技有限公司，批号ZL091.108，纯 度〉99%）;泼尼松龙（内标，批号1001.5.3.1.99603, 中国食品药品检定研究院）；试验用水为超纯水，甲醇 为色谱纯，其他为分析纯试剂。 健康6?1.2月龄Beagle犬8只，雌雄各半，体重 （1.3.5.1±065） kg，由南京中医药大学实验动物中 心提供，合格证号SCXK （苏试验前驯 养观察2周。 2方法 2.1犬血浆中雷公藤红素LCMS/MS测定 2.1.1色谱与质谱条件Phenomenex Luna C8色谱 柱（20mmX50mm，3 u m）；流动相甲醇乙腈异丙 醇溶液（1:1） 1%。甲酸 1.5 : 5.5 : 30，流速 2.50 U L?min-1；柱温 3.5 °C。 质谱条件：离子源为ESI源；离子源电压5 500 V; 离子源温度300 °C;正离子方式检测；扫描方式为多 反应监测（MRM）;用于定量的离子分别为雷公藤红 素，m/z 4.5.1.3/201.1[M+H]+,泼尼松龙（内标），m/z 3.61.1/1.4.71[M+H]+o 2.1.2对照溶液配制精密称取雷公藤红素1088 mg，置于10 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度， 摇匀，即得1 088mg?L-l雷公藤红素的储备液；再以 甲醇溶液依次稀释，配成质量浓度分别为1 3.60， 6800，2.720, 1.3.60，6800，2.720, 1.3.60，6800 u g?L-l的雷公藤红素系列浓度对照溶液。同法制备含 雷公藤红素分别为1 088，1088，1088 ug?L-l高、 中、低不同浓度质控标液。 内标泼尼松龙对照溶液的配制：精密称取泼尼松 龙对照品993 mg，置于2.5 mL量瓶中，加入甲醇溶 解，超声1