UPLPATFMS法测定柴胡中柴胡皂苷a定性定量分析.docVIP

UPLC-PDA-TOFMS法测定柴胡中柴胡皂苷a定性定量分析 董传健(连云港润众制药有限公司 222006) 】目的对柴胡中柴胡皂苷a进行定性和定量分析。方法木文实验采用 超高效液相色谱-光电二极管阵列-飞行时间质谱仪联用技术的新方法进行。采用 Waters Acquity UPLC 系统，使用 ACQUITYUPLCBEHC18(50mmtimes;2.1mm, 1.7mu;m)色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱。质谱条件为电喷雾电离源(ESI), 正离子监测。结果柴胡样品的色谱图谱峰与柴胡皂苷a的谱峰一致，确证了其 存在性；通过色谱峰保留信息、PDA数据及一级、二级质谱数据对柴胡中柴胡皂 苷a的含量测定计算。结论采用新方法实现柴胡皂苷a成分的在线分离分析检 测，并对其进行定性定量测试中取得了较好的效果，实现了对柴胡中柴胡皂苷a 进行定性和定量分析。 关键词】药物分析 UPLC-PDA-TOFMS柴胡皂苷a 定性定量分析 1R927.2 】A 】2095-1752 (2013) 01-0032-02 柴胡为伞形科(Umbelliferae)中的柴胡属(Bupleurum LJ植物干燥的根，一 种中草药，能够解热镇痛且利肭保肝。中医用药中柴胡可以实现和解退热以及疏 肝解郁和升阳举气［1］。其主要的活性成分为柴胡皂苷类，其次为柴胡挥发油。 科学家［2］已经从小叶的黑柴胡中分离出了 5个皂苷以及2个皂苷元。木文通过 实施建立超高效的液相色谱(UPLC)来测定小叶黑柴胡中柴胡皂苷a、d的含量并 对小叶黑柴胡的质量实施控制。UPLC法柱效、灵敏度均较高，其分析时间被大 大的缩短。采用超高效液相色谱-质谱联用的方法，能够进一步对柴胡中的柴胡 皂苷a进行有效分析，来测定柴胡皂苷a的有效含量［3-4］。 1仪器与试药 1.1仪器 色谱仪是由美W Waters公同提供的ACQUITY Ultra Performance LC超高 效液相色谱仪，其具备高压二元梯度泵以及控温自动进样器和二极管阵列检测器 其同吋拥有Empower2色谱工作站。飞行吋间质谱仪冋吋配备相成的电喷雾离子 源(ESI源)和G1969ATOF/MS,Agilent色谱数据工作站以及Ana]ystQS。所需电子分 析天平是AL204型电子分析天平其由梅特勒-托利多有限公司上海分公司生产。 提取器的由北京金鼐科技发展有限公司生产的jHBE -20A型闪式提取器。 1.2药品试剂 柴胡，由上海华宇药业有限公司提供的，经严格鉴定其为伞形科植物- 北漿胡Bupleurum chinense DC。漿胡皂宵a对照品则是由中国药品生物制品鉴定 所提供，其生产批号为：110777-200303。试剂为甲醇、乙腈其均为色谱纯，水 为自制的双蒸水。 2方法 2.1分析条件 色谱条件 ACQUITYUPLCTMBEHC18 柱(2.1 mmtimes;100 mm, 1.7mu;m);流动相乙腈(A)-2mmol?L-l醋酸铵溶液⑻。梯度洗脱条件如下表 表一：梯度洗脱条件 流速0.2mL?min — 1;柱温35 °C;样品室温度4 °C;进样量10 mu;Lo 2.2质谱条件 电喷雾离子源(ESI);正、负离子同吋检测；全扫描(MS scan),扫描范围 m/z 100 ?1000;毛细管电压 3.0kV(ESI+) , 2.8 kV(ESI —);锥孔电压 25V;源温 120°C;去溶剂气温度450°C;去溶剂气流速500L?h-l;锥孔气流速30L?h — 1。 2.3样品制备 对照品溶液：精密称取适量对照品柴胡皂苷a,用甲醇进行溶解将其配 制成0.504mg/mL的标准溶液，将其做为对照品贮备液。同吋精密的量取其2mL 置于10mL的量瓶中，定容并摇匀得到对照品溶液。 供试品溶液：称取柴胡2g (过20 0筛)，加入5%的氨水-甲醇混合液， 进行3次的冋流提取，每次吋间为2min。将滤液进行合并并浓缩至10mL,得到 柴胡的单煎液。精密的吸取所得单煎液l.OmL置于25mL的量瓶中，用甲醇溶液 进行标准定容，在采用0.22mu;m滤膜进行过滤，得到续滤液，即所需供试品 溶液。 2.4测定波长的选择 精密量取ImL的对照品储备液，将其置于10mL的量瓶中，加入甲醇溶 液进行标准定溶并充分摇匀，采用紫外-可见分光光度法，扫描波长设定 200-400nm之间。结果对照品溶液在206nm波长处吸收度最大，由相关的参考 文献［5】，确定检测波长为210nm。 2.5色谱条件 色谱柱为C18 （250times;4.6mm,5mu;m），?其流动相则为水-甲醇的混 合液比例为30: 70,其流速可达到1.0mL/min,所检测波长为210nm，柱温为 20deg;C,进样量为