从法医相关性昆虫体内提取人类DNA的研究进展　.docVIP

从法医相关性昆虫体内提取人类DNA的研究进展 【 】本文从嗜血性昆虫、嗜尸性昆虫、嗜骨性昆虫 及实验技术等多角度阐述了从法医相关性昆虫嗉囔中提取 人类DNA的可 行性及国际研究和应用进展。 【关键词】法医昆虫学；嗉囔；个体识别；DNA 【 】D919. 1 【 】B 【 】1007—9297 (XX) 04—0308?04 随着分子生物学技术的发展，DNA在刑事案件及 民事案件中发挥了巨大的作用。对于死亡重罪中的个 体识别及将罪犯与现场的关联方面.DNA技术屡建奇 功。而在亲子鉴定，打击拐卖人口方面，DNA技术也展 现了其非凡的魅力。目前较常见有从现场血痕、毛发、 牙齿、香烟过滤嘴及搔抓当事人时指甲缝中的残留物 中提取扩增DNA。同时，作为新兴学科，法医昆虫学在 人类DNA的提取扩增中逐渐得以应用。 法医昆虫学是介于法医学和昆虫学的交叉学科， 主要用于刑事案件中被害人死亡时间的推断（PM I）。 【 】万香波（1980-）~J，河南XX人，中山大学 基础医学院法医病理研究生。Tel: +86—20E-m ail： Wan1712e you. com ［通信 】王江峰，法医病理博士后，副教授；研究 方向：法医昆虫学。 ［基金项目】国家自然科学基金项目“基于嘈尸性昆虫 的死亡时间推断”（基金编号：3010 0216）;广东省自然科学 基金项目（基金编号：0 01386） 法律与医学杂志XX年第12卷（第4期） 前法医昆虫学方法已被认为是腐败尸体死亡时间 推断最有效的方法。除此之外，法医昆虫学亦可用于 死亡地点、死者中毒情况甚至死者身份的判别。曰常 临案工作常见的为嗜尸性、嗜血性昆虫。由于其在现 场取食尸体组织，叮吸当事人的血液，因而扩增其胃 肠道（即嗦囔）中未消化的人的DNA、线粒体DNA，则 可望成为谋杀、强奸等案件以及用于死亡时间推断的 昆虫是否与被害人尸体相关中个体识别的直接证据。 嗉囔作为昆虫的食物储存器官而非消化器官。故而没 有蛋白水解酶的分泌。虽然昆虫在吞噬食物时其唾液 中有少量蛋白酶，但这种预消化对宿主DN A的降解 很少。故而对嗉囔内容物中的宿主DNA进行提取、扩 增则成为个人识别的理想底物 、法医相关性昆虫 (一)嗜血性昆虫 临案工作中常见的嗜血性昆虫为虱和蚊。由于其 常常从一宿主转移至另一宿主，因而使之成为强奸、 谋杀等案件中当事人曾在案发现场的有力证据。 法医临案中常见的蚊为按蚊(Diptera: Culicidae)，最 初常用免疫学方法通过对血型的检验进行个体识别 的粗筛以及确定被蚊吸食的脊椎动物的种系。［1,21随 的研究发现，用PCR方法从按蚊(Diptera : Culicidae) 的 嗉囔(bloodmea 1)中扩增宿主DNA，其吸食血液后的 消化时间在0, 8，16, 24, 32 h时与宿主DNA的成功扩 增率在逻辑回归曲线上呈明显的负相关，且宿主DNA 扩增的成功率在吸食后1 2—24h时下降得最快(P二 0. 001)。但通过对扩增的TC 一 11、VWA两段短串联重 复序列(STR)的观察发现，在上述任一时点嗉囔内血 量的多少对两位点的成功扩增影响不大，且在同一时 点，两位点扩增的成功率几乎相等(P=0. 85)。此外， 周 环境对蚊的消化速率影响较大，32cc时的消化速率 为22cl=时的两倍。通过在实验室温度为27°C、吸食血 液后最长32h时仍可扩增出宿主DNA的事实，可知 在温度升高或降低时其成功扩增的极限时间亦随之 缩短或延长。［31由此可见，由于分子生物学中PCR技 术的成熟，使微量DNA的成功扩增成为可能。因而从 蚊的嗉囔中提取扩增宿主DNA时，影响扩增成功与否 的主要因素是吸食后的消化时间而非嗉囔内血量的 多少 寄生于人身上的虱分为体虱与头虱。Rep I ogle等网 最早于19 94年从17只阴虱，的排泄物中通过AMP— FLP技术获得了人类特异性基因座D1S180及 HUMTHO1,其与阴虱所寄生的宿主相一致，但是Re— plogle并未扩增出完整的DNA。Lord等［51在1999年 成功地从阴虱Pthi rusPu bis(L)中分离、扩增出宿主的 线粒体DNA (mtDNA)。人类线粒体DNA (mtDNA)位于 核染色体外，具有组织特异性，为共价闭合的环状双链 DNA分子。没有重组、倒置、易位等突变现象，具有较 高的保守性，组成也相当稳定，严格遵守母系遗传。人 类线粒体DNA大小为16. 5Kb，包括2srRNA、22s t RNA及13个编码特定功能多肽的基因。［6, 71每一个 细胞内核DNA仅有两个拷贝，而线粒体DNA却有上 千个拷贝。因而在细胞的量较少或是检材高度降解，难 以对核DN A成功扩增时，对线粒体D NA进行扩增，结