流感病毒RNA聚合酶活性-研究——一种比PB1抑制活性更强的小肽的鉴定.pdfVIP

第一章流感病毒RNA聚合酶研究背景介绍………………．I 第一节 流感病毒RNA聚合酶介绍………………………………………。1 1．I．1流感病毒结构介绍……………………………………………………………。I 1．1．2流感病毒分类…………………………………………………………………。2 1．1．3 流感病毒生活周期………………-……………………………………………．2 I．1．4流感症状介绍……………………………………………………………………5 第二节 抗流感病毒药物靶点………………………………………………5 1．2．1 目前抗流感药物靶点……………………………………………………………5 1．2．2潜在抗流感药物靶点…………………………………………………………。7 第三节 流感病毒RNA聚合酶结构的研究现状…………………………10 1．3．I H5NI流感病毒RNA聚合酶PAc．PBIN的晶体结构………………………．10 1．3．2 H5NI病毒RNA聚合酶PAN的晶体结构……………………………………13 第二章主要实验原理………………………………………………．14 第一节 表面等离子共振原理……………………………………………。14 第二节 热稳定实验原理…………………………………………………。15 第三节 蛋白质晶体学主要流程…………………………………………一17 2．3．1蛋白质表达与纯化……………………………………………………………．17 2．3．2蛋白质结晶……………………………………………………………………18 2．3．3数据收集………………………………………………………………………2l 2．3．4数据处理………………………………………………………………………．2l 2．3．5结构解析………………………………………………………………………．．22 2．3．6模型检验………………………………………………………………………22 第四节 酶联免疫吸附测定原理……………………………………………22 III 第三章实验材料与方法…………………………………………．24 第一节 流感病毒RNA聚合酶亚基PAc的表达与纯化…………………24 3．1．1实验材料…………………………………………………………………………．24 3．1．2实验方法………………………………………………………………………．25 第二节 小肽溶液制备………………………………………………………27 3．2．1 PB 1N制备………………………………………………………………………27 3．2．2截短小肽制备…………………………………………………………………27 3．2．3突变小肽制备…………………………………………………………………27 第三节 亲和力强弱测定…………………………………………………。27 3．3．1表面等离子共振实验…………………………………………………………．27 3．3．2热稳定性实验…………………………………………………………………。27 第四节 结晶条件的筛选与优化…………………………………………。28 3．4．1结晶条件筛选……………………………………………………………………28 3．4．2结晶条件优化…………………………………………………………………29 第五节 数据收集与结构解析……………………………………………。29 第六节 酶活体系建立……………………………………………………．．29 3．6．1酶活体系建立……………………………………………………………………30 第四章实验结果与讨论…………………………………………31 第一节 流感病毒RNA聚合酶亚基PAc表达与纯化……………………31 第二节 小肽溶液制各………………………………………………………32 第三节 亲和力强弱测定……………………………………………………32 4．3．1表