网站大量收购独家精品文档,联系QQ:2885784924

粗品肝素中有害杂质的检测-生物化工专业论文.docx

粗品肝素中有害杂质的检测-生物化工专业论文.docx

  1. 1、本文档共54页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
粗品肝素中有害杂质的检测-生物化工专业论文

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他 个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保密□, 在 年解密后适用本授权书。 不保密□。 (请在以上方框内打“√”) 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 I I 摘 要 肝素是 Dag Mclean 在 1916 年研究凝血机制时发现的一种酸性粘多糖。它是一 种是由糖醛酸(L-艾杜糖醛酸 IdoA;D-葡萄糖醛酸 GlcA)和葡萄糖胺(α-D 葡萄 糖胺 GlcN)组成的具有不同链长的多糖链混合物。到目前为止,还没有能够完全代 替它的药品,仍是最重要的生化药物之一。肝素广泛分布在哺乳动物肝、肺、肠粘 膜、心、肾、脾、胎盘、胸腺、肌肉和血液等组织中。2008 年,从海外进入美国的 肝素原料药和最终成品中发现人为添加的多硫酸软骨素(over-sulfated chondroitin sulfate,OSCS)。随着有关肝素产品的有害报导的不断增加,通过 FDA、企业和研 究机构的协作研究证实某些病人的过敏反应与在肝素中存在 OSCS 有关。因此,OSCS 的检测成了肝素粗品质量控制重要指标之一。据国外文献报导 核 磁 共 振 氢 谱 (1H-nuclear magnetic resonance, 1H-NMR)从 OSCS 污染的肝素中可以检测到异于肝 素的 N-乙酰基甲基峰,通过检测这一特征峰可以判断肝素中是否含有 OSCS 污染物。 另外,国外的研究团队对强阴离子交换高效液相色谱(strong anion exchange-high performance liquid chromatography,SAX-HPLC)检测肝素中 OSCS 含量的方法进行 了相关的研究。由于牛海绵状脑病以及其他动物病毒疾病的存在,猪来源的唯一性 就成了确保肝素安全性的一条关键要求。本研究的主要工作如下: 1.1H-NMR 检测粗品肝素中 OSCS 调节 pH 除去粗品肝素中的蛋白质,以 80%乙醇等体积沉淀肝素对粗品肝素进 行了预处理;以 400MHz 、298K 和 64 次扫描的条件检测粗品肝素的 N-乙酰基甲基 信号。经过多次试验均未检测到待测样品中存在的 OSCS 的 N-乙酰基甲基峰信号, 而 DS(硫酸皮肤素)的 N-乙酰基甲基峰信号总是伴随着肝素的信号出现。因此判定 待检粗品肝素样品未受人为添加的 OSCS 的污染,并且含有大量的 DS。通过添加适 当的 OSCS 标准品至粗品肝素中,考察 1H-NMR 检测 OSCS 的检测限。当 OSCS 添 加量为 0.25%时信号响应微弱以至于难以与噪音分辨,所以确定该方法对 OSCS 的检 测限为 0.5%的添加量。 II II 2.SAX-HPLC 检测粗品肝素中 OSCS 参照美国 FDA 文献的方法,在粗品肝素中添加适量的 OSCS 美国药典标准品确 立 OSCS 的检测限。两种方法得到的结果与核磁共振的结果一致,添加 0.25%OSCS 美国药典标准品的粗品肝素中的 OSCS 特征峰很难辨别;因此,SAX-HPLC 检测粗 品肝素中 OSCS 的检测限为 0.5%的添加量。美国 FDA 文献建立的方法所耗费的时间 比中国药典 2010 年版要短,更具有实际采用的价值。 3.实时荧光定量 PCR 检测粗品肝素中的反刍基因 考察了 2 种引物和 2 种荧光定量 PCR 方法对于粗品肝素中反刍基因的扩增情 况。2 组引物均会引起猪 DNA 与反刍动物 DNA 产生交叉反应,该交叉反应对猪 DNA 和反刍 DNA 的鉴别不构成严重障碍。对猪、反刍的 DNA 检测限分别为 1.16pg/μl、 0.05 pg/μl 和 0.116 pg/μl、0.05 pg/μl。荧光探针体系中的交叉反应效果较轻,特异性 更好,对反刍动物 DNA 的检测限为 0.05 pg/μl。因此,在检测费用充裕的情况下, 采用荧光探针法检测粗品肝素中的反刍基因更准确。 关键词: 粗品肝素;多

您可能关注的文档

文档评论(0)

peili2018 + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档