《喜树碱》课件.pptVIP

喜树碱的生产 姓名：孙玉蓉 学号：20082926335 班级：生工学0801 喜树碱 一、喜树碱的理化性质 分子式C20H16N2O4 浅黄色针状结晶(甲醇-乙腈) ，分解264℃∽267℃，[α]25D +31.3。 (氯仿-甲醇) 。在紫外光下表现强烈 的蓝色荧光，和酸不能生成稳定的盐 二、喜树碱的应用 一般用作药物制作的成分 抗肿瘤，免疫抑制，抗病毒，抗早孕，改变皮肤表皮的角化过程。 喜树碱的市场需求 （一）喜树碱的主要来源 喜树的幼芽、叶以及果实中含量较多 目前生产喜树碱一般都是从果实或夜中提取 （二）喜树碱的市场需求情况 随着以喜树碱为原料开发的临床药物需求的不断扩大，可持续获得喜树碱及其衍生物已成当务之急。 现在世界范围内喜树碱唯一可行的市场来源仍然是从野生植物(主要是喜树)中提取，然而，喜树(Camptotheca acuminata)为珙桐科喜树属植物，中国特有树种，国家二级保护植物。喜树野生资源毕竟有限，单纯靠从植株中提取势必造成对自然资源和生态环境的巨大破坏，也不能满足市场的需要，利用植物细胞培养法生产喜树碱被认为是一条很有希望的替代途径。 据估计，喜树碱类药物全球年销售额大约是10亿美元 。 生产喜树碱的主要公司 国内大约60多家生产公司 淄博奥特精细化工厂（山东） 上海北卡医药技术有限公司 （专业生产） 上海龙翔生物医药开发有限公司 （上海） 四川锐博科技有限公司 成都天源天然产物有限公司 喜树碱生产工艺 以喜树果实为原料，将其粉碎后用8～10倍量60％～90％乙醇对其进行浸泡24～48小时后渗漉，渗漉时间为10～15小时，减压70～80℃浓缩渗漉液至原体积的1/6～1/9，将所得浓缩液静置5～48小时，滤过，以氯仿萃取滤液，用量为浓缩液体积的0.5～3.0 倍量，萃取次数为2～4次，合并氯仿萃取液经浓缩得膏状物，再依次以甲醇作溶剂对其进行重结晶纯化得喜树碱粗品，以氯仿-甲醇(1∶3～3∶1)混合溶剂对所得粗品重结晶纯化得喜树碱粗晶，以N，N-二甲基甲酰胺-乙醇(1∶ 5～5∶1)混合溶剂对粗晶进行精制纯化得喜树碱精品，即喜树碱产品。 喜树碱的生产工艺 新的发展 幼芽喜树碱含量最高,叶片、果实其次,二年生枝条喜树碱含量高于一年生枝条.湖北民族学院学报（自然科学版）2009年3期 选择喜树生长较好的胚轴 愈伤化 摇瓶培养 大规模悬浮培养 提取 培养基 碳氮比 通过改变MS培养基中氨态氮和硝态氮的不同摩尔比例及初始总氮来提高喜树悬浮培养细胞的生长和喜树碱的生物合成，在ms培养基中，70mM的硝酸盐而去掉铵盐，悬浮培养细胞生长最快，而氨态氮和硝态氮的摩尔比为5：1，总氮为40mM时，悬浮培养细胞喜树碱的生物合成能力最强。通过改变氮源的两部培养可使细胞的生物量，喜树碱含量和喜树碱产量分别达到35.59g/ml、0.03565%,和11.51mg/l (二)温度 一般为22-26度 （三）pH 5.5-6.5 （四）诱导因子 试验通过在喜树悬浮培养细胞的不同时期，加入不同浓度的真菌诱导子或抗褐变剂的方法，研究其对细胞生长和喜树碱合成的影响。结果表明，米根霉提取物作为真菌诱导子，对喜树碱的生物合成最有效。植酸作为抗褐变剂，对细胞生长和喜树碱的生物合成最有效。在15天加入终浓度2 g／L的植酸，再在18天加入终浓度30 mg／L的米根霉诱导子处理，细胞干重在24天时达到最大值26．9 g／L，是对照细胞干重最大值的1．2倍；喜树碱总产量在26天时达到最大值34．2 mg／L，是对照总产量最大值的9．0倍。对照的细胞干重和喜树碱总产量在2O天时达到最大值。 喜树细胞悬浮培养中，添加真菌诱导子和抗褐变剂是提高喜树碱产量的有效方法之一。 总结喜树细胞培养条件 悬浮培养细胞在MS培养基中细胞生长良好，细胞分散性和喜树碱积累优于在其他培养基中。最佳激素组合为2，4-D 0.2 mg／L+NAA 0.5 mg／L+6-BA 0．5 mg／L，细胞继代周期以12 d左右为宜，悬浮细胞适合在22～26‘C，120 r／min下生长。悬浮培养细胞在第4～20天为对数生长期，细胞倍增时间为t(d)一3.92/ d，细胞千重至第20天达到最大，为27．44 g／L。在细胞对数生长期内，喜树碱积累与细胞生长呈线形正相关性，第20天喜树碱质量分数达到最大值9．319×10-5，喜树碱产量为2．56 mg／L 工业化生产 采用气升式发酵罐培养 温度：22-26度 通气培养，需不断通入氧气 喜