基于cry1Ac表达调控元件苏云金芽孢杆菌表达载体构建.docVIP

基于cry1Ac表达调控元件苏云金芽孢杆菌表达载体构建 　　摘要：通过克隆ｃｒｙ１Ａｃ基因ＢｔＩ－ＢｔＩＩ启动子、ＳＤ序列以及终止子，并引入ｐＥＴ２８ａ的Ｈｉｓ标签和多克隆位点，在穿梭载体ｐＨＴ３０４的基础上构建了一个苏云金芽孢杆菌表达载体ｐＢＭＢ１Ａ。将ｃｒｙ１Ａｃ以及具有非典型ＢｔＩ－ＢｔＩＩ启动子的ｃｒｙ２Ａｂ、ｃｒｙ５Ｂａ、ｃｒｙ６Ａａ、ｃｒｙ７Ｂａ、ｃｒｙ５５Ａａ ６个基因装载到该表达载体上，转入BMB171构建了重组菌株，通过复红简单染色后的显微镜镜检结果表明，重组菌株BMB1A-1Ac、BMB1A-5Ba、BMB1A-7Ba和BMB1A-55Aa均能形成正常晶体，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果也证实这４个重组菌株的重组质粒均能表达出目的蛋白。同时，选取重组菌株BMB1A-1Ac来考察Ｈｉｓ标签对Ｃｒｙ１Ａｃ杀虫活性的影响，生物活性测定结果显示重组菌株的ＬＣ５０值与对照菌株相比无明显差异。该载体可用于快速克隆表达不同类别的Ｃｒｙ蛋白。 　　关键词：苏云金芽孢杆菌；表达载体；ｃｒｙ基因；ＢｔＩ－ＢｔＩＩ启动子 　　中图分类号：Ｑ７８２；Ｑ９３９．９６ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）02－0400-06 　　 　　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒ ｂｙ Ｕｓｉｎｇ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ 　　Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｃｒｙ１Ａｃ Gｅｎｅ 　　 　　ＺＨＥＮＧ Ｗｅｎ，ＹＥ Ｗｅｉ－ｘｉｎｇ，ＰＥＮＧ Ｄｏｎｇ－ｈａｉ，ＳＵＮ Ｍｉｎｇ 　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， 　　Ｗｕｈａｎ ４３００７０， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｎａｍｅｄ ｐＢＭＢ１Ａ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂｙ ｃｌｏｎｉｎｇ ＢｔＩ－ＢｔＩＩ ｐｒｏｍｏｔｅｒ， ＳＤ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ， ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｏｆ ｃｒｙ１Ａｃ ｇｅｎｅ， ａｎｄ ａｄｄｉｎｇ Ｈｉｓ－ｔａｇ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ｓｉｔｅｓ （ＭＣＳ） ｆｒｏｍ ｐＥＴ２８ａ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｓｈｕｔｔｌｅ ｖｅｃｔｏｒ ｐＨＴ３０４． Ｃｒｙ１Ａｃ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｆｉｖｅ ｃｒｙ ｇｅｎｅｓ ｗｉｔｈ ａｔｙｐｉｃａｌ ＢｔＩ－ＢｔＩＩ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｃｒｙ２Ａｂ， ｃｒｙ５Ｂａ， ｃｒｙ６Ａａ， ｃｒｙ７Ｂａ， ｃｒｙ５５Ａａ ｗｅｒｅ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｐＢＭＢ１Ａ． Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Cｒｙ１Ａｃ， Cｒｙ５Ｂａ， Cｒｙ７Ｂａ ａｎｄ Cｒｙ５５Ａａ ｃｏｕｌｄ ｆｏｒｍ ｐａｒａｓｐｏｒａｌ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｉｅｓ； Aｎｄ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅｍ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｄｕｃｅ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｍａｊｏｒ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ ｃｒｙｓｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂａｎｄｓ． Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ， Cｒｙ１Ａｃ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｈｉｓ－ｔａｇ ｏｎ ｉｔｓ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ， ａｎｄ ｔｈｅ ｂｉｏａｓｓａｙ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＬＣ５０ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｒａｉｎ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｒｙ ｇｅｎｅｓ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ； ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ； ｃｒｙ ｇｅｎｅ； ＢｔＩ－ＢｔＩＩ ｐｒｏｍｏｔｅｒ 　　苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｂｔ），是一种革兰氏阳性土壤芽