肝细胞生长因子通过调控上皮-间质转化影响非小细胞肺癌转移的初步研究-外科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 第一章 中文摘要3 HYPERLINK \l _bookmark1 第二章 英文摘要6 HYPERLINK \l _bookmark2 第三章 前言 11 HYPERLINK \l _bookmark3 第四章 材料与方法16 HYPERLINK \l _bookmark4 第五章 实验结果24 HYPERLINK \l _bookmark5 第六章 讨 论32 HYPERLINK \l _bookmark6 第七章 结论36 HYPERLINK \l _bookmark46 攻读硕士学位期间取得的研究成果50 HYPERLINK \l _bookmark47 致 谢51 HYPERLINK \l _bookmark48 学位论文原创性声明52 HYPERLINK \l _bookmark49 学位论文知识产权权属声明52 HYPERLINK \l _bookmark50 关于学位论文使用授权的说明52 2 万方数据 万方数据 广州医科大学硕士学位论文 中文摘要 第一章 中文摘要 【研究背景】 近几十年来肺癌的发病率、死亡率逐渐上升，肺癌已经取代肝癌成为世界 上恶性肿瘤死亡原因的第一位 HYPERLINK \l _bookmark7 [1, HYPERLINK \l _bookmark8 2]。在我国，肺癌的发病率和病死率都呈逐年增 长的趋势 HYPERLINK \l _bookmark9 [3]。目前，对于肺癌来说最有效的治疗手段仍然是手术治疗，无法行手 术治疗的肺癌患者只能接受化疗、放疗或靶向治疗等 HYPERLINK \l _bookmark10 [4-7]。但初诊肺癌病人仅有 20~30%左右可以接受手术，70~80%为中晚期病人则失去根治手术机会。部分根 治性治疗以及大多数中晚期病人姑息性治疗后，最终都会因为癌症复发、转移或 耐药而不能控制肿瘤导致疾病进展，这都是肺癌患者高死亡率的重要原因。因此， 寻找肺癌预后的相关指标对治疗方案的选择和提高患者生存率具有很大的意义。 HGF/MET 信号通路作为肿瘤转移的重要机制之一，近来在肿瘤领域逐渐开 展了越来越多的科学研究。首先，HGF 作为 HGF/MET 信号通路激活的配体， 对信号的启动有至关重要的作用，但它在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）影响及其作用机制仍有许多空白。其次，最近研究表明 HYPERLINK \l _bookmark14 [8-12]， HGF 与 c-Met 可能相互促进，并可以通过各种交叉通路对话影响肿瘤的侵袭和 转移。因此，我们探讨探究了 HGF 对肺癌的影响及其发生作用的分子机制，并 进一步探讨 HGF 在 NSCLC 的表达及其预后作用。 【研究目的】 探讨 HGF 在肺癌细胞的表达及其对肺癌细胞侵袭转移的作用以及分子机 制，并进一步探讨 HGF 在 NSCLC 的表达与临床病理因素的关系及其对预后的 影响，为寻找预测肺癌预后的标志物提供实验数据。 【研究方法】 1. 细胞体外培养：实验室下培养包括 A549 及其耐药株 A549/DDP，耐药细胞 株需要 DDP 维持。 2. 以 A549 及其耐药株 A549/DDP 为细胞研究对象，培养并提取细胞总 RNA， 并 RT-PCR 法检测 HGF 在细胞中的表达水平。 3. Western blot 法检测 HGF 及 EMT 标志蛋白的表达：根据 mRNA 的表达水平 验证 A549、A549/DDP 细胞经 HGF 处理前后的 HGF、c-Met 及 EMT 标志蛋 3 广州医科大学硕士学位论文 白的表达变化。 4. RT-PCR 法检测并验证过表达 HGF 前后癌细胞中 HGF、MET、EMT 相关基 因的变化。 5. 细胞划痕实验（Cell wound scratch assay）：细胞划痕实验检测外源性添加 HGF 刺激诱导前后 A549、A549/DDP 细胞的迁移能力。 6. 细胞侵袭迁移实验（Transwell assay）检测过表达 HGF 前后的侵袭能力的变 化。 7. 免疫组织化学法（Immunohistochemistry, IHC）：以 IHC 法检测 HGF、MET 蛋白在人体肺癌组织中的表达情况。 8. 统计学方法：采用 SPSS 13.0 以及 GraphPad Prism 6 Demo 软件进行统计分析， 实验数据以均数±标准差表示，组间比较采用 t 检验分析，多样本比较应用 单因素方差分析。检验水准仅=