肺癌组织SOX4基因突变的分析-动物学专业论文.docxVIP

肺癌组织 SOX4 基因突变的研究 摘 要 SOX 基因是一类与 DNA 序列特异结合编码转录因子的基因家族,其 编码的产物具有一个 HMG 保守基序，在个体发育过程中参与多种发育 过程的调控。人类 SOX 基因的缺失或突变可导致发育异常和严重的先天 性疾病。如人类 SOX9 突变可引起 CD 综合征和性反转，SOX10 突变引 起 Waardenbury-Hisschsprang(WS)综合征(WS)等。 石蜡包埋标本 DNA 对医学上大宗病例的回顾性研究具有重要意义。 本文从石蜡包埋肺癌组织中，采用几种不同的预处理方法，标本组织经 二甲苯脱蜡后，用 PBS 缓冲液 60C温浴处理 4-8h，再用不同梯度酒精处 理，最后用 PBS 缓冲液常温处理 4-8h。比直接用酒精梯度处理所获得的 DNA 质量要高，且 PBS 缓冲液的 pH 值在 7.5-8.5 时最佳。 肺癌是当前常见的恶性肿瘤之一，其致病原因也非常复杂。研究表 明 SOX4 基因的变化与肺癌的发生具有一定的关系。本文采用 PCR-SSCP 及 PCR 产物直接测序等技术，对 15 例肺癌患者的组织标本及 8 例正常 对照个体血细胞 SOX4 基因编码区进行了突变分析。结果在 15 例肺癌组 织中筛选出 5 例 SOX4 基因突变，分别位于 461bp、679bp、687bp、692bp、 698bp、712bp、713bp 和 716bp 处，而 8 例正常对照个体中均未检出。 在 5 例突变中，4 例在 692、698、713、716bp 由 G/C/T/C 突变为 C/G/C/T; 2 例在 679、712bp 由 G/C 突变为 A/ T。1 例在 461bp 由 C 突变为 A;1 例在 687bp 由 G 突变为 C。所有突变位点除 461bp 外，其余均位于 HMG-box 内，而氨基酸突变均位于 HMG 盒内。提示 SOX4 基因突变可 能与肺癌的发生有一定的关系。 本研究首次报道了肺癌组织中 SOX4 基因突变的情况，为探索 SOX 基因突变与人类疾病发生之间的关系提供了分子资料。 关键词: SOX4 ， 肺癌， PCR， 石蜡包埋组织 Studies on the SOX4 gene mutation of lung cancer tissue Abstract The SOX gene family is characterized by the presence of a HMG domain involved in various developmental processes. The encoded proteins are capable of binding to DNA in a sequence-specific manner. In human, the deletion or mutation of SOX proteins results in developmental defects and congenital disease. It has been shown that mutation in the human SOX9 gene cause campomelic dysphasia (CD) and autonomic sex reversal, the mutation of SOX10 gene cause Warrensburg syndrome (WS), and so on. The specimen DNA is important for the research of reviewing large quantity cases in medicine. This paper reports different pretreatment methods of paraffin embedded lung cancer tissues before DNA extraction. After taking off paraffin wax with Xylene , first infuse them into PBS buffer for 4-8 hours in water bath, the temperature was 60C, then handle them with different concentration of alcohol. The result showed that this method can acquire long DNA fragments, and the PBS buffer at pH 7.5-8.5 gave higher