茯苓菌产锰过氧化物酶及其应用的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

中高称此料钱来嗲 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研 究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文 不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品，也不包含为 获得中南林业科技大学成其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。对本文的研究作出重要员献的个人和集体，均已在文中以明确方 式表明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名:匀泛- 7tfif年 d 月 7 日 中高休止科教式嗲 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论 文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论 文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权 中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于: 1 、 保密口，在年解密后适用本授权书。 2 、 不保密团。 (请您在以上相应方桩打 .J 勺 ， 作者签名:均 导师签名:叫 到 年 b 月 7 日 冽叭月)R 硕士毕、Ik论文 t在号;肉 t:城i:t氧化物酶及其应闸的研究 摘在E 摘 :!iZ:. 锚过氧化物酶是一种最常见的降解木质素的过氧化物隅，主要存在于各种担 子菌巾。伏苓 [Poria cocos (Schw.) Wol f]为担子菌纲多孔前科真菌，主要以药用， 它是一种兼性寄生菌，腐生则是重要的木材腐朽菌。前人很少对孩苓的木质索降 解酶进行研究。 本文以锚过氧化物晦为对象，选择侠苓 (P.cocos) 为产酶两种，对其培养条 件进行优化:然后利用盐析、层析等技术将锚过氧化物响分离纯化;并研究了解 该酶的酶学性质，问时测试了该酶对染料和造纸黑液的脱色降解能力。 大多数真菌在限氮条件下产锚过氧化物酶能力较强。所以，以高碳低氮培养 基为伏苓发酵产锚过氧化物酶的基础培养基。伏苓 (P.cocos) 的最佳产酶条件为: 煎糖浓度 20g/L ，蛋白陈浓度0.2g/L 其它元素浓度 150ml/L (MnS04 .2H20 0.2g ， CaCh.2HzO O.lg ，NaCl 19，ZnS04.7H20 O.lg ，FeS04 7H20 O.lg ，CUS04 5H20 O.lg ， CoC}z O.l g ，KAl(S04 )z- 12H20 O.Olg ，HB03 0.01g ，Na2Mo04.2H20 O.Olg) ，金属 制离子浓度 0.5mmol/L ，肘，温80 为 Ig/L ，初始pH 值为 4.5 ，250ml 三角瓶中装液 最为 80ml ，培养温度为3S.C ，转速为160r/mino 产晌培养基中添加 0.5mmol/L 浓度的不同金属离子，有利于偏过氧化物响的形成，其中添加 Mg2+ ， ca2+ ， K2有助于 MnP 的产生。添加表面活性剂吐温 80 对 MnP 的活性影响显著，与对照栩 比可极大的提高 MnP 酶活。过是因为吐温 80 能够活化衰老的商珑，在培养后期 促进产酶。此培养基周期为 10 天，最高酶活力为 1249.7U瓜，明显提高了产酶 效率。 在夜苓菌锚过氧化物酶纯化过程中，经过浓缩及 35% 、85%饱和度的硫酸饺 分级分离沉降后，又经 Q-Sepharose? Fast Flow 离子交换后析，可以得出至少有 两种 MnP 酶存在，分别命名为 MnP 1 、MnPII 。纯化后回收卒分别为6.21 %和 7.33% ，测定两银过氧化物酶的分子量分别为46.66kDa 和 43.61kDa; 在酣学性质 方面 MnP 最适温度为 40.C ，对热的稳定性在 20-40.C; 最适 pH 值为 5.0，在 pH4.0-5.0 范围酶的稳定性最好。酶的动力学测试以 2 ，6一二甲氧基盼为底物测 得 MnP 的 Km 值为 21.27umol/L ，最大反应速率为0.997Sumol/mino 曾有报道锚过氧化物酶对偶氮类、二苯甲炕类、自昆胶类等染料和造纸厂的黑 液的脱色降解赳到明显的作用。本实验是就针对该胞对染料酸性楼和结晶紫的脱 硕士毕业论文 优等阙，.-r锚. u氧化物酶及其服用的研究 色情况进行研究。结果表明 MnP 对染料结晶紫和酸性橙降解脱色的最适反应条件 为: pH5.0 ，反应瓶度为40.C ，H202 的浓度为 0.15mmol 瓜。对立苯甲炕炎染料结 晶紫脱色效果较饵.脱色率最高为 53% 。从对造纸广黑液的降解脱色试验可以看 出，黑浓的稀释倍数是一个非常重要的条件， MnP 对造纸黑液降解脱色的最适反 应条件为:黑液稀释 50 倍， pH3.0 ，反应温度为40.C 。脱色卒达到27.8% 。 关键询:在苓:锚