肺炎支原体Ohr样蛋白的结构及功能的初步研究-病原生物学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 缩略语 主要中英文缩写 全 称 中 文 名 称 氨基酸 AA/aa Amino acid A560 absorbance at 560 nm 560nm 处吸光度 A310 bp absorbance at 310 nm Base pair 310nm 处吸光度 碱基对 BSA Albumin Bovine Serum 牛血清白蛋白 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP Deoxyn deoside triphosphate 脱氧三磷酸核苷酸 DTT Dithioth eitol 二硫苏糖醇 EB Ethidium bromide 溴化锭 ECL Enhanced chemiluminescence 增强化学发光 EDTA Ethylene diamietetraacetic acid 乙二胺四乙酸 FOX Ferrous Oxidation-Xylenol Orange 氧化铁二甲酚橙 GSH Reduced glutathione 还原型谷胱苷肽 GSSG Oxidized Glutathione 氧化型谷胱甘肽 IPTG LB Isoprop-β-D-thiogalactopyranoside LB medium 异丙基-β-D-硫代半乳糖 LB 培养基 Mp Mycoplasma pneumoniae 肺炎支原体 NC Nitrocellulose 硝酸纤维素膜 OD Optical density 光密度 OHP Organic Hydroperoxide 有机氢过氧化物 Ohr Organic Hydroperoxide Resistance Protein 有机氢过氧化物抗性样 ORF Open reading frame 开放阅读框 OX xylenol orange 二甲酚橙 PAGE polyacrylamide gelelectrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosophate buffered saline 磷酸盐缓冲液 rMPN668 Recombinant MPN668 重组 MPN668 蛋白 rpm Revolutions per minute 每分钟转数 RT-PCR Real-time Polymerase chain reaction 实时聚合酶链式反应 SDS Sodium Dodecyl Sulphate 十二烷基硫酸钠 SDS SDS-polyacrylamide gel eletrophroresis SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 t-BHP tert-butyl hydroperoxide 叔丁基过氧化氢 TBS Tris-buffered Saline Tris 缓冲盐溶液 TBST Tween20/ Tris-buffered Saline 吐温 20/Tris 缓冲盐溶液 TEMED N,N, N′N′-tetramethylethylenediamine N,N,N′N′-四甲基乙胺 Tris Tris-(Hydroxymethyl) aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 肺炎支原体 Ohr 样蛋白结构及功能的 初步研究 硕士研究生： 陈列松 导 师： 吴移谋 教授 中 文 摘 要 目的： 研究肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）重组 MPN668 蛋白 是否具有降解有机氢过氧化物（Organic Hydroperoxide，OHP）的能力，并通过 分子模拟解析 rMPN668 的结构，初步分析其结构与酶活性的关系，以进一步了 解 Mp 的致病机制。 方法：以 Mp129 株基因组 DNA 为模板，PCR 法扩增目的基因 mpn668，将其 亚克隆至 pGEX-6P-1 载体中。经鉴定后将其转化至表达菌 E.coli BL21 中进行诱 导表达。采用 SDS和 Western blotting 等方法对表达产物进行分析鉴定并 纯化 GST 融合蛋白；切除重组蛋白 GST 标签后，采用氧化铁二甲酚橙（Ferrous Oxidation-Xylenol Orange ，FOX）实验检测其氢过氧化物酶活性。固体培养 Mp， 随后将其置于氧化应激条件下培养 3~5d，RT-PCR 检测 mpn668 mRNA 的表达水 平。利用同源建模和分子动力学等方法，通过软件 Expasy 与 HYPERLINK /Research/vmd/ Visual Molecular HYPERLINK /Research/vmd/ Dynamics（VMD）模拟 rMPN668 的分子结构，并对其已预测出的酶活性位点的 氨基酸进行定点突变，通过诱导表达获得△rMPN668