灯盏花提取物对体外高压培养鼠视网膜神经节细胞骨架影响的实验研究-中医五官科学(眼科)专业论文.docx

成都中医药大学硕士学位论文 成都中医药大学硕士学位论文 1 1 中 文 摘 要 目的：（1）观察高压导致大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs） 凋亡时细胞骨架的改变。（2）观察灯盏花提取物(DSX)对高压导致大鼠 RGCs 凋 亡时细胞骨架改变的影响，并对其作用机理进行初步探讨。 方法：将 RGCs 常规培养 72h 后，分为常压组，高压组(80mmHg、4h )，DSX 低 剂量组(0.5 mmol/l)，DSX 中剂量组(1. 0 mmol/l )，DSX 高剂量组(1.5 mmol/l )并 加压加药 4h 后收集细胞，流式细胞仪检测细胞周期和细胞 DNA 含量， FITC-phalloidin 标记细胞骨架，激光共聚焦显微镜下观察 F-actin 分布。 结果:（1）加压 80mmHg、4h 导致大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡，高压 组细胞凋亡率高于常压组（P0.05）。（2）加压 80mmHg、4h 导致大鼠视网膜神 经节细胞（RGCs）骨架微丝产生变化：伪足产生、应力纤维消失、微丝断裂、 呈非极性分布。（3）加入 DSX 干预后，低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞凋 亡率明显低于常压组（P0.05）；（4）加入 DSX 干预后，低剂量组、中剂量组、 高剂量组细胞骨架微丝发生变化：微丝排列、断裂情况较高压组好转，骨架结构 得到一定修复。 结论：（1）高压可改变大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的形态，促进细胞凋亡。 （2）高压导致大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）骨架微丝发生改变。（3）DSX 能降低细胞凋亡率，修复细胞骨架微丝变化，对高压所致的大鼠视网膜神经节细 胞（RGCs）的损伤有保护作用。 关键词： 视网膜神经节细胞；细胞培养；压力；细胞凋亡；细胞骨架； 视 神经保护 2 2 Abstract Purpose: (1) To establish high pressure cell cultured model of retinal Ganglion cells(RGCs) in vitro. (2) To observe the changes of cytoskeleton of apoptosis retinal Ganglion cells(RGCs) cultured with high pressure in vitro. (2) To observe the effects of Chinese medicine DSX for changes of cytoskeleton of apoptosis retinal Ganglion cells(RGCs) cultured with high pressure in vitro. Methods: Group the 72 hours normal cell cultured cells as : normal pressure group ， high pressure group (pressured by80mmHg、4h) ， Low-dose group (0.5 mmol/l)， Medium dose group (0.5 mmol/l)，high dose group (1.5 mmol/l)， prssrue and dose the normal cell cultured cells 4hs later， RGCs were collected and check the sum of apoptosis cells by Flow Cytometry，and cytoskeleton of RGCs were labled by FITC—phalloidin， and Observe the F-actin distribution under Laser scanning confocal microscopy . Results: (1) Pressure couse the apoptosis of rat retinal ganglion cell (RGCs) ，and the percent of apoptosis of Model group more high than the normal pressure group’s. (2) Pressure couse the changes of cytoskeleton of retinal Ganglion cells(RGCs) : Microfilament fractured， stress fibers、pseudopodia occurred， and s