肥胖通过激活mTOR信号和抑制SIRT1信号加速卵巢卵泡的发育与消耗-遗传学专业论文.docxVIP

201 2010 级硕士研究生毕业论文 2010 2010 级硕士研究生毕业论文 I I PAGE PAGE VI 英 文 缩 略 词 英文缩写 Acr 英文名 Acrylamide 中文名 丙烯酰胺 AP ammonium persulfate 过硫酸铵 Bis N,N,-Methylenebisacrylamide N,N,-亚甲双丙烯酰胺 BSA Bovine Serum Albumin 牛血清白蛋白 DAB 3,3’-diaminobenzidine 3’3-二氨基联苯 DTT Dithiothreitol 二硫苏糖醇 EB Ethidium Bromide 溴化乙锭 HE NAD+ hematoxylin and eosin Nicotinamide adenine dinucleotide 苏木素-伊红染色 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化形态 NC nitrocellulose filter membrane 硝酸纤维素膜 PAGE Polyacryl amide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 rpm rotate per minute 每分钟转数 GC granular cell 颗粒细胞 CO cumulus oophorus 卵丘 CLC copora luteum cell 黄体细胞 SDS Sodium dodecyl sulphate 十二烷基磺酸钠 SIRT Silent information regulator 信息沉默因子 TEMED N,N,N’,N’-tetramethyl ethylene diamine N,N,N’,N’-四甲基乙二胺 Tris N-tris(hydroxymethyl) aminomethane N-三(羟甲基)氨基甲烷 AB apoptotic body 凋亡小体 VF visceral fat 腹部脂肪 NC Normal control 正常对照 CR Caloric restriction 能量限制 HF High fat 高脂 POF, premature ovarian failure 卵巢早衰 肥胖通过激活 mTOR 信号和抑制 SIRT1 信号加速卵巢卵泡的 发育与消耗 摘 要 研究背景及目的 肥胖已经成为一种影响成年人和儿童的全球流行性疾病，流行病学的研 究表明，过多的身体脂肪影响女性生殖功能，可导致女性月经紊乱、不排卵和不育。但是 肥胖影响女性生殖功能的机制还不清楚。已有研究证实，CR 可以延长各种动物的寿命， 也使哺乳动物的卵巢寿命延长，但 CR 延长卵巢寿命的机制也还不十分清楚。近期研究表 明，mTOR 信号在肥胖及其相关疾病中发挥着重要作用；而 SIRT 家族是调控 CR 延长动物 生命的重要因子，SIRT1 转基因小鼠寿命延长，卵泡发育受到抑制，性成熟推迟。提示 mTOR 和 SIRT1 信号可能参与调控卵巢发育。本研究以成年 Sprague Dawley (SD)雌性大鼠为研究 对象，用高脂食物喂养和能量限制方法建立肥胖和能量限制大鼠模型,旨在研究肥胖与能 量限制对成年雌性大鼠卵巢寿命和卵泡发育的影响及其作用机制。 材料与方法 36 只成年雌性 SD（Sprague Dawley）大鼠随机分为对照（NC）组(自由取食 标准的动物饲料)，高脂（High-fat，HF）组(自由取食添加了 20 %猪油的标准饲料)，能量 限制(Calorie Restriction，CR)组摄食 NC 组 70 %的饲料。每只大鼠单笼饲养，自由取水。 每天早上对大鼠实施阴道涂片观察大鼠动情周期并记录大鼠的进食量。连续喂养 18 周后， 按 0.3 mg/100 g 体重的剂量腹腔注射戊巴比妥钠，将大鼠麻醉后用颈椎脱臼法处死大鼠。 剖开腹腔，取各组大鼠的肾周脂肪及双侧卵巢并称重。苏木素-伊红（hematoxylin-eoxin， HE）染色观察并分别计数 5 张有代表性的组织切片中各级卵泡数以及各级卵泡数占总卵泡 数的比例。通过免疫组化来观察 mTOR 信号和 SIRT1 信号中各因子在卵巢各类卵泡细胞中 的表达与定位。通过 Western blot 来检测卵巢中 mTOR 信号和 SIRT1 信号中各因子，如 mTORC1, p-S6K1, SIRT1, SIRT6, FOXO3a 和 NRF-1 的蛋白表达水平。 结果 在饮食处理期间，NC 组的摄入量为 16.6 ± 0.1 g/d，摄入能量为 65.2 ± 0.7 kcal；CR 组摄入量为 12.1 ± 0.1 g/d，摄入能量为 47.2 ± 0.3 kcal；HF 组的摄入量为 14.8 ± 0