肺炎链球菌临床分离株耐药机制和常见血清型及毒力基因研究-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 调查天津医科大学总医院临床分离肺炎链球菌对常用抗菌药物的敏感 性，检测其常见血清型及毒力基因的分布情况，并对其耐药机制进行初步分析， 为合理使用抗生素治疗肺炎链球菌感染提供依据同时控制该耐药菌株在医院内 的传播。 方法 收集2012年10月至2014年4月天津医科大学总医院临床分离的非重复肺 炎链球菌72株，应用Vitek-2 compact 全自动细菌分析系统及配套鉴定卡和相应 微量肉汤稀释试验分别进行菌种鉴定和药敏试验；应用聚合酶链反应（PCR）方 法检测大环内酯类抗菌药物耐药基因，包括红霉素核糖体甲基化酶基因（ermB）、 主动外排基因(mefA、mefE)，四环素耐药基因(tetM)以及转座子整合酶基因 (intTn)；常见血清型基因（3、6A/B、14、15A、19A、19F、23F）及毒力基因 自溶素基因（lytA）、溶血素基因( ply)及神经氨酸酶基因(nanA)。PCR扩增的基 因阳性产物进行测序并与GenBank数据库比对。 结果 72 株肺炎链球菌药敏结果显示，对万古霉素、利福平均敏感，对左氧 氟沙星、头孢噻肟、氯霉素、阿莫西林、青霉素敏感率大于 76%，其中对青霉 素耐药率 PRSP 为 1.4%，中介率 PISP 为 22.2%、敏感率 PSSP 为 76.4%。对红 霉素、克林霉素、四环素敏感率低于 10%。72 株肺炎链球菌携带红霉素耐药基 因 ermB 65 株（90.3%）、mefE 17 株（23.6%）、mefA 9 株（12.5%）、四环 素耐药基因 tetM 63 株（87.5%），转座子整合酶基因 intTn 62 株（86.1%）， 其中 ermB+tetM+intTn 38 株（52.8%）。对四环素耐药的肺炎链球菌 tetM 基因 阳性率是 93.8%，高于四环素敏感菌株（20%）；对四环素耐药的菌株，其对 红霉素和克林霉素的耐药率亦高于四环素敏感的菌株；intTn 基因阳性组的红霉 素、克林霉素和四环素的耐药率较 intTn 基因阴性组高。72 株肺炎链球菌常见 血清型依次为 19F (15，20.8%)、3 (12，16.7%)、23F (9，12.5%)、6A/B (8，11.1%)、 14 (6，8.3%)、19A (4，5.6%) 和 15A (2，2.8%)。毒力基因检测结果为 lytA 65 株（90.3%）、ply 67 株（93.1%）、nanA 52 株（72.2%），其中 51 株（70.8%） 同时携带 lytA、ply 和 nanA 三种基因，12 株（16.7%）同时携带 lytA 和 ply 基因，1 株（1.4%）同时携带 ply 和 nanA 基因。PCR 扩增产物经测序并与 GenBank 数据库比对后均为目的基因。 I 结论 本研究的临床分离肺炎链球菌对万古霉素、利福平敏感率均为100%，左 氧氟沙星、氯霉素、头孢噻肟敏感率较高，对红霉素、克林霉素和四环素耐药 率较高。临床分离的肺炎链球菌同时携带多种耐药基因，其中最常见的耐药基 因组合方式为ermB+tetM+intTn，ermB基因和tetM基因分别是引起大环内酯类抗 菌药物和四环素类抗菌药物耐药的主要机制，intTn基因可能是介导肺炎链球菌 多重耐药的重要机制，临床医师应注意合理用药。血清型19F、3 和 23F是主要 常见的血清型，本地区人群接种肺炎链球菌疫苗时应首选含有这三种血清型的 PCV13荚膜多糖抗原疫苗。毒力基因 lytA 和 ply 检出率较高，为进一步研究 毒力因子的作用机制提供一定基础，并为研制抗肺炎链球菌新药和预防肺炎链 球菌感染的新型疫苗提供帮助。 关键词 肺炎链球菌 耐药基因 血清型 毒力基因 红霉素 II Abstra