根据细胞周期联合使用他克莫司和霉酚酸酯治疗系膜增生性肾病的实验分析-内科学专业论文.docx

4 参考文献 21 第三部分 根据细胞周期联合使用他克莫司和霉酚酸酯抑制体外培养的人系膜细胞 增殖 23 1 材 料 与 方 法24 1.1 细胞株与试剂 24 1.2 细胞培养 24 1.3 实验分组 24 1.4 用药方法 24 1.5 免疫荧光染色检测 Ki 67 阳性的细胞核比例 25 1.6 蛋白印迹( West er n bl ot ) 25 1.7 统计学分析 26 2 结 果 27 3 讨 论 31 4 参考文献 32 第四部分 根据细胞周期联合使用他克莫司和霉酚酸酯抑制 狼 疮性肾 炎小 鼠系膜细 胞增殖 34 1 材 料 与 方 法35 1.1 实验动物 35 1.2 主要仪器和试剂 35 1.3 实验分组 35 1.4 实验方法 35 TOC \o 1-1 \h \z \u HYPERLINK \l _TOC_250003 PAS 染色 36 HYPERLINK \l _TOC_250002 MASSON 染色 36 HYPERLINK \l _TOC_250001 1.7 免疫组化法检测 Ki 67 和 PDGF 的表达 36 HYPERLINK \l _TOC_250000 1.8 蛋白印迹( West er n bl ot ) 37 1.9 统计学分析 38 2 结 果 39 3 讨 论 46 4 参考文献 47 第五部分 根据细胞周期联合使用他克莫司和霉酚酸酯抑制狼疮性肾炎患者系膜细 胞增殖 49 1 资 料 与 方 法50 1.1 研究对象纳入标准 50 1.2 研究对象排除标准50 1.3 治疗方法 51 1.4 注意事项 51 1.5 所有入试患者临床资料52 1.6 肾脏病理资料 52 1.7 主要仪器和试剂 52 1.8 免疫组化法检测肾组织中 Ki 67、PDGF、Cycl i nD1 的表达 53 2 结 果 54 3 讨 论 59 4 参考文献 60 结 论 62 综 述 63 致 谢 72 在学期间承担/ 参与的科研课题与研究成果73 个人简历75 山西 山西医科大学博士学位论文 I I 根据细胞周期联合使用他克莫司和霉酚酸酯治疗系膜增生 性肾病的实验研究 摘 要 系膜细胞异常增殖是增生性肾小球疾病共同的病理改变，系膜细胞过度增 殖可引起系膜基质增多，最后导致肾小球硬化、终末期肾衰竭的发生。因此， 抑制系膜细胞过度增殖可以延缓、阻止肾小球疾病的进展。从 2008 年开始，本 课题组开始探索按照细胞周期动力学原理选用两种可以将细胞周期阻滞于不同 时相的免疫抑制剂，联合治疗系膜增生性肾小球疾病，这种用药方案是否具有 更好的治疗效果，本课题将予以研究。 本实验包括以下五部分： 第一部分 他克莫司和霉酚酸酯对体外培养的人系膜细胞周期的影响 目的： 探讨他克莫司和霉酚酸酯对人系膜细胞细胞周期的作用。 方法： 人系膜细胞分为对照组和用药组，用药组分别加入 1μmol/L 、5μmol/L 的他 克莫司或 2.5μmol/L、10μmol/L 的霉酚酸酯，分别培养 24h、48h、72h，用 MTT 法测细胞增殖、流式细胞仪测细胞周期、流式细胞仪测细胞凋亡。 结果： 5 μmol/L 他克莫司作用于人系膜细胞 48 h，细胞在 S 期的比例下降了 41％， II II 在 G0/G1 期的百分比增加，1μmol/ L 和 5μmol/ L 的他克莫司作用 48 h 均未对人 系膜细胞的细胞凋亡产生影响。2.5μmol/ L 和 10μmol/ L 的霉酚酸酯作用 24, 48 以及 72h 均可抑制人系膜细胞的增殖，明显抑制细胞进入 G2/M 期，2.5μmol/ L 和 10μmol/ L 的霉酚酸酯作用于人系膜细胞 48h 均可引起细胞凋亡且呈剂量依 赖性，10μmol/ L 的霉酚酸酯引起的细胞凋亡更明显。 结论： 他克莫司可以阻断人系膜细胞由 G1 期进入 S 期，霉酚酸酯可以阻断人系 膜细胞由 S 期进入 G2 期，二者可以将细胞周期阻滞于不同时相。 第二部分 他克莫司和霉酚酸酯抑制人系膜细胞周期性增殖的机制 目的： 探讨他克莫司和霉酚酸酯抑制人系膜细胞周期性增殖的机制。 方法： 实验 1 分为正常对照组（CTL 组）、TGF-β1 组、正常对照+他克莫司组 （CTL+TAC 组）、TGF-β1+他克莫司组（TGF-β1+TAC 组）。实验 2 分为正常对 照组（CTL 组）、PDGF 组、正常对照组+霉酚酸酯组（CTL+MMF 组）、PDGF+ 霉酚酸酯组（PDGF+MMF 组）。分别用 Wester